应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】蛋白原核表达求助
51/1返回列表
查看: 1505  |  回复: 11
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

wmqouc

金虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】蛋白原核表达求助

各位大侠：
大家好！
我要表达一水溶性蛋白，序列如下
“center]mkvsaallwl lliaaafspq glt" gpasvpt tccfnlanrk iplqrlesyr ritsgkcpqk
avifktklak dicadpkkrw vqdsmkyldq ksptpkp，共97个氨基酸。
用pet28质粒,BL21宿主菌表达，一直表达纯化不好，后来换用pmal-p4x质粒，TB1宿主菌表达，表达纯化仍然不好。
最近发现该蛋白的前23个氨基酸（引号划线部分）是信号肽，成熟的是没用这23个氨基酸的。请问各位大侠，这个蛋白表达纯化不出来，是否和这23个氨基酸的信号肽有关系呢？
请各位大侠赐教！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼2010-11-26 17:19:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

181587941

金虫 (正式写手)

是胞内表达吗

原核表达一般都是胞内的多吧？而且一般在包涵体内吧？不要没分泌出来，你当然纯化不到咯，你做个超声波破碎，看看包涵体内有没有>?
赞一下 回复此楼
12楼2010-11-28 20:44:06
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

skkyy88888

铜虫 (著名写手)
wmqouc(金币+1): 2010-11-26 18:48:05
序列中有起始密码子嘛？
赞一下 回复此楼
2楼2010-11-26 18:17:33
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
wmqouc(金币+1): 2010-11-26 18:58:17
wmqouc(金币+1): 2010-11-26 18:59:11
wmqouc(金币+1): 2010-11-26 18:59:11
到底是表达不好还是纯化不好?
表达不好可能跟信号肽有关，纯化不好跟信号肽没关系的。
赞一下 回复此楼
3楼2010-11-26 18:34:42
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snoopyzxx

木虫 (著名写手)
wmqouc(金币+1): 2010-11-26 18:49:09
28a载体用的酶切位点是啥？
如果是融合表达，大肠杆菌可能就不会把前面那段当成信号肽的。
赞一下 回复此楼
4楼2010-11-26 18:37:17
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复(可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭