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wangdandelia

木虫 (正式写手)

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[交流] 【求助/交流】DNA纯化问题已有14人参与

请问各位虫友，在进行酶切之后纯化回收DNA，只是简单的纯化，不需要切胶，你们都是怎么纯化的？用哪个试剂盒比较好呢？我现在遇到了纯化的问题，真是举步维艰啊！

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1楼 2010-11-26 09:05:25

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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)

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★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+1):谢谢参与，不过楼主说的是才产物纯化 2010-11-26 17:18:03

引用回帖:

Originally posted by wangdandelia at 2010-11-26 09:05:25:
请问各位虫友，在进行酶切之后纯化回收DNA，只是简单的纯化，不需要切胶，你们都是怎么纯化的？用哪个试剂盒比较好呢？我现在遇到了纯化的问题，真是举步维艰啊！

做连接转化过程中的酶切无非两种：PCR产物和质粒载体。

PCR产物一般带有酶切位点和保护碱基，而质粒载体多克隆位点的长度并不长，双酶切是为了保证连接时候的方向性。

我们实验室一般用的是QIAGEN的胶回收试剂盒，直接在产物中加入5倍的溶胶液，然后过柱回收，大约小于100bp的片段不会结合到柱子上，这样既保证了回收产物的纯度，也比切胶回收的效率高。