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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请问有做植物彗星实验的吗？
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yewawaly

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】请问有做植物彗星实验的吗？

做了几个月彗星实验，都没有成功！希望小木虫里有高人指点一下迷津！
我做的植物是美人蕉叶片，但是看到文献里大部分是做的蚕豆叶，不过也有做其他植物的。
实验方法：最初采用的是机械分离法，但是却划不出什么来。后来改用酶解法，2%果胶酶和纤维素酶混合酶解。洗液为CPW-甘露醇洗液，最后的悬浊液也是用的该液体。酶解时间做过4、6、12h.分离原生质体采用蔗糖梯度离心法。
制片的过程我采用我们实验室用于动物实验的过程。裂解1-1.5h，然后再电泳，电泳电流试过15mA,电压不固定，300mA，电压20V，300mA,30V,电泳20-30min.
我的问题是：
1.采用机械分离法，在电镜下我没有发现任何类似原生质体的物质，全是些碎片，后采用酶解法，看到了些椭圆或圆形的物质，不知道是否是原生质体？
2.无论怎样更改电压和电流，均没有发现其右拖尾现象？





[ Last edited by yewawaly on 2010-11-24 at 09:49 ]
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1楼 2010-11-24 09:46:41
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w2boluo

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
yewawaly(金币+1):谢谢参与
西瓜(金币+3): Good 2011-09-08 22:06:39
西瓜(金币+3): Good 2011-09-08 22:06:39
酶解法分离原生质体对植物是常见和经典的技术。失败原因往往是时间过长。不要到了4小时才去显微镜下观察，半小时开始看，1小时左右你就会有惊喜了。：P
赞一下(3人) 回复此楼
4楼2011-09-08 21:41:01
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laq3389797

银虫 (初入文坛)
★
yewawaly(金币+1):谢谢参与
能不能把你分离细胞核的详细方法给我一份哈，谢了。
关于你的问题，你看看裂解和解旋的时间是不是可以延长一下哈？
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2楼2011-08-02 15:26:49
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lpflyss

铁虫 (初入文坛)
★
yewawaly(金币+1):谢谢参与
帮你顶起，我也遇到了一摸一样的问题，机械分离法划不出细胞，根本达不到文献上写的密度，求助啊~~~~
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3楼2011-09-08 19:58:57
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Bamboo猫猫

新虫 (初入文坛)
★
yewawaly(金币+1): 谢谢参与
我也在做彗星实验，请问酶解法用到的纤维素酶和果胶酶对酶活有要求吗？
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5楼2014-04-01 16:18:03
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