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maxwell1988金虫 (小有名气)
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[交流]
【求助/交流】关于酶切产物连接的一点问题 已有5人参与
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最近在做重组基因的连接，但是连了好几次就是连不上。具体是这样的，希望高手帮忙答疑解惑下： 基因(~0.5kb)是单酶切，载体(~5kb)是双酶切，20μl体系，基因载体按摩尔比算的体积比： 基因 2μl 载体 9μl buffer 2μl PDG 2μl T4连接酶 5μl 22℃，16h。 之后就是常规的转化了，菌落PCR，单酶切鉴定后发现条带的大小不对，宣告连接失败。  要命的是做了好几次，甚至有次还做了基因载体比例的梯度连接实验，结果还是以失败告终。我想知道问题可能出在了什么地方，有什么地方可以改进的，望各位大侠们不比吝赐教！！！ |
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maxwell1988
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11楼2010-11-21 09:19:08
maxwell1988
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额。。。 [ Last edited by maxwell1988 on 2010-11-21 at 11:07 ] |
13楼2010-11-21 10:30:31