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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】大肠杆菌基因组提取
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liuyuexinfei

木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】大肠杆菌基因组提取

用酚/氯仿法提取大肠杆菌基因组时，加入酚、氯仿、异戊醇混合物后，上层变得非常的粘稠（有点像蛋清的样子），很难吸到不含蛋白的上清液，请问各位提取的时候采取什么办法？
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1楼 2010-11-16 13:25:42
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liuyuexinfei

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by hyy2005bne at 2010-11-16 14:17:33:
窝一开始做的时候吸上清老把那层粘稠的吸上来,后来就先把那层粘稠的弄出来,再离一次心.

什么意思，你是将上面粘稠的部分先吸出来直接离心还是再加酚、氯仿、异戊醇后再离心啊，我是按后者方法做的，还是不行，还有蛋白。有没有更好的办法，你提出来的基因组纯度怎么样？
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3楼2010-11-16 15:03:00
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hyy2005bne

新虫 (小有名气)
★
liuyuexinfei(金币+1): 2010-11-16 15:03:07
dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-11-17 08:36:17
窝一开始做的时候吸上清老把那层粘稠的吸上来,后来就先把那层粘稠的弄出来,再离一次心.
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2楼2010-11-16 14:17:33
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hyy2005bne

新虫 (小有名气)
liuyuexinfei(金币+1): 2010-11-21 09:36:16
引用回帖:
Originally posted by liuyuexinfei at 2010-11-16 15:03:00:





什么意思，你是将上面粘稠的部分先吸出来直接离心还是再加酚、氯仿、异戊醇后再离心啊，我是按后者方法做的，还是不行，还有蛋白。有没有更好的办法，你提出来的基因组纯度怎么样？

直接离心,我那个是提出来直接PCR,用目的基因,跑电泳目的条带挺亮的.
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4楼2010-11-16 16:22:18
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zhangxn2010

木虫 (著名写手)
★
dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-11-17 08:36:37
liuyuexinfei(金币+1): 2010-11-21 09:36:21
上清二次离心效果还不错，或者加氯仿再抽提一次离心
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5楼2010-11-17 08:12:00
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