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oloing

铜虫 (初入文坛)

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[交流] 【求助/交流】5'RACE试剂盒的选择？已有9人参与

我打算做5‘RACE。查了一些资料，现在用得比较多的是clontech的smart技术试剂盒或者invitrogen的mRNA5’端加接头技术。

据我分析，clontech的smart技术试剂盒的优点是实验流程简单，避免对RNA样品的反复操作，缺点是RNA末端的特异性完全依赖锚定引物，如果有截短的mRNA分子，会出现常呈现不清晰的成片条带或截短的产物背景，即特异性不高，估计会对后期的结果判断和鉴定工作造成麻烦。而invitrogen的mRNA5’端加接头技术的优点是CIP首先筛除了不完整的mRNA分子，TAP脱帽，加接头后扩增如能得到阳性结果，则特异性相对较高，同时，缺点是操作复杂，要对RNA分子反复纯化三次之多，这过程中也难保不出问题。

所以我在这两种试剂盒的选择问题上犹豫不定，因为没有经验，不知道该选择哪种。我想问用过clontech的前辈，是否真的弥散带或者多条带是最常见的结果？最后阳性克隆测序时候，要测多少克隆才能得到想要的结果？而用过invitrogen的前辈，过程是不是像我想的那么复杂，都有些什么问题出现呢?

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1楼 2010-11-09 16:37:50

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墨香若水

木虫 (著名写手)

小小囧虫

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引用回帖:

1906840楼: Originally posted by 阳光金鱼唐 at 2010-11-09 19:01:33
选clontech的smart吧，我之前用的TAKARA的，也就是去磷酸化、去帽子、加接头，颠来倒去一天过去什么都没有了，反复失败。还是操作流程短一点比较好，成功几率高。我现在买了个clontech的smart试剂盒，TAKARA的太差劲 ...

clontech也是TAKARA的