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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】考马斯亮蓝染色，条带较少？
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350784478

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】考马斯亮蓝染色，条带较少？ 已有4人参与

跑完蛋白之后，进行考马斯亮蓝染色，然了一个小时以上，然后再脱色半小时，发现蓝色条带比较少，这是为什么？难道是因为我提取的蛋白含量太少的缘故？
还请各位帮忙解决一下困惑。
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朝为田舍郎，暮登天子堂。将相本无种，男儿当自强。
1楼 2010-11-08 12:29:13
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tianhuijuan

金虫 (小有名气)
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amisking(金币+1):good！ 2010-11-08 19:34:48
考马斯亮蓝染色液重复使用的次数多的话，染色效果会不好，要多次染色和脱色，直至染色效果理想；也可新配染色液。
    所提取蛋白量少的话，条带自然少、小。
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2楼2010-11-08 12:48:37
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350784478

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by tianhuijuan at 2010-11-08 12:48:37:
考马斯亮蓝染色液重复使用的次数多的话，染色效果会不好，要多次染色和脱色，直至染色效果理想；也可新配染色液。
    所提取蛋白量少的话，条带自然少、小。

我没有重复使用，只是放置了一阵子（可能就三周吧），脱色的话，我想应该不存在问题。
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朝为田舍郎，暮登天子堂。将相本无种，男儿当自强。
3楼2010-11-08 12:58:14
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tianhuijuan

金虫 (小有名气)
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引用回帖:
Originally posted by 350784478 at 2010-11-08 12:58:14:

我没有重复使用，只是放置了一阵子（可能就三周吧），脱色的话，我想应该不存在问题。

染色液没问题的话，应该是所提蛋白的事了。要是常提蛋白的话，凭经验可以判断的——平均可以提出来的量。
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4楼2010-11-08 13:37:31
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shyuyafeng

木虫 (正式写手)
★
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条带少是什么意思？lz说的再清楚点，是指你跑的样应该出现3-4个条带，只出现了1-2他条带，这个意思吗？
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if only
5楼2010-11-08 16:22:03
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一夜不留痕

银虫 (初入文坛)
★
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说明你纯化的比较纯了呗 难道是粗提》？
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最好不相见，如此便可不相恋
6楼2010-11-08 22:21:29
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350784478

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by shyuyafeng at 2010-11-08 16:22:03:
条带少是什么意思？lz说的再清楚点，是指你跑的样应该出现3-4个条带，只出现了1-2他条带，这个意思吗？

差不多，我提取的是全蛋白，但是只是出现1-2条条带，而且非常细，都快看不见了。
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朝为田舍郎，暮登天子堂。将相本无种，男儿当自强。
7楼2010-11-09 09:03:21
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shyuyafeng

木虫 (正式写手)
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引用回帖:
Originally posted by 350784478 at 2010-11-09 09:03:21:

差不多，我提取的是全蛋白，但是只是出现1-2条条带，而且非常细，都快看不见了。

可能的原因：1.蛋白的提取是不是有什么问题，你确定你的蛋白是否都溶了。
                  2.你电泳的操作是否有问题，建议可以用marker跑一下，检测你是手法的问题还是样品的问题。
                  3.胶的浓度是否有问题，有没有分开，根据你的蛋白分子量看看胶浓度有没有问题。
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if only
8楼2010-11-09 11:35:15
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