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求知的学生

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】SDS-PAGE检测蛋白纯度已有11人参与

大家好,我现在有一些蛋白质的冻干粉,想用SDS-PAGE测一下纯度,应该如何做?胶跑完之后,该如何处理,怎么计算浓度?望不吝赐教,谢谢!
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tryhtr

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+3):欢迎分享经验! 2010-11-03 20:46:29
我们实验室的做法:
首先蛋白按说明书要求溶解后测蛋白浓度,如果你的蛋白比较纯,可以用UV280,BCA等方法
然后根据蛋白的浓度,计算约10ug上样跑电泳,原因是上样量要能够保证少量杂质也能显示在胶上。
8楼2010-11-03 20:40:33
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

★ ★
求知的学生(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+1):鼓励交流。 2010-11-03 14:25:25
求知的学生(金币+1): 2010-11-03 17:11:00
蛋白粉加LOADING BUFFER后加热处理,再SDS-PAGE电泳,考马斯亮蓝或者银染,检测纯度。测浓度的话用考马斯亮蓝G250法595nm测定好了。具体操作一般的实验书上都有的。
3楼2010-11-03 14:21:56
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者


求知的学生(金币+1):谢谢参与
楼上说得很全了,
另外建议,
如果自己没做过,还是找个此类实验室的好。

那些试剂自己配太麻烦了。
【我一直认为做土匪很性感很坏,很直接,可以大声喊:JCMM我爱你!所以,我自从博士毕业后,就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
4楼2010-11-03 16:10:59
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求知的学生

金虫 (小有名气)

谢谢各位的热心解答!
5楼2010-11-03 17:12:16
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