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huang1030

金虫 (小有名气)

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[交流] 【求助/交流】关于MS培养基已有24人参与

最近刚接触植物组织培养，有一些关于培养基的细节不知道，请各位前辈多多指教，谢谢！
1、MS培养基的母液是一定要保存在四度冰箱吗？室温下可不可以啊？
2、植物生长调节剂是怎么溶解的啊？我在网上又看到说“溶解生长素时，可用少量0．5 –1N的NaOH 或95%酒精溶解，溶解分裂素类用0．5 –1N的HCl加热溶解。如再加蒸馏水，易产生白色沉淀，此时可加入热水。”，也有说“将2，4-D和NAA用少量(1 mL)无水乙醇预溶，将6-BA用少量(1 mL)的物质的量浓度为0.1 mol/L的NaOH溶液溶解，溶解过程需要水浴加热”
3、植物生长调节剂是高温灭菌之前还是之后加进去啊？

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1楼 2010-11-02 12:41:07

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耿广锋

银虫 (初入文坛)

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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
jhu132llh(金币+5, EPI+1): good,鼓励一下 2011-07-23 16:05:13

1配制MS大量元素母液
一般将大量元素分别配制成100倍的母液，使用时再分别稀释100倍。
分别称取
NH4NO3    165g
KH2PO4    17g
KNO3       190g
CaCl2•2H2O 44g
MgSO4•7H2O 37g
用蒸馏水分别溶解，按顺序逐步混合。倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。配制培养基时，每配1L培养基取此液10ml。
注意：、(1) 配制大量元素母液时，要用纯度高的重蒸馏水溶解，药品采用等级较高的分析纯，各种化学药品必须先以少量重蒸馏水使其充分溶解后才能混合，混合时应注意先后顺序。特别应将Ca2+、SO42一、Mg 2十和H2PO4一等离子错开混合，速度宜慢，边搅拌边混合。
   (2)CaCl2•2H2O要在最后单独加入，在溶解CaCl2•2H2O 时，蒸馏水需加热沸腾，除去水中的CO2，以防沉淀。另外，CaCl2•2H2O放入沸水中易沸腾，操作时要防止其溢出。
2配制MS微量元素母液
一般将微量元素配制成100倍母液。每配制1L培养基，取微量10ml
依次称取
KI             0.083g Na2MoO4•2H2O 0.025g
H3BO3          0.62g MnSO4•H2O       1.69g
ZnSO4•7H2O    0.86g
CoCl2•6H2O       0.0025g
CuSO4•5H2O    0.0025g
配成1L母液，倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。
CuSO4•5H2O和CoCl2•6H2O 由于称取量很小，如果天平精确度没有达到万分之一，可先配成调整液。
分别称取CuSO4•5H2O 0.05g CoCl2•6H2O 0.05g各自配成100ml的调整液，然后取5ml就还有0.0025g的量。
3.配制MS有机母液
一般配制成100倍MS有机母液。
依次称取
肌醇             10g          盐酸硫胺素（VB1） 0.01g
烟酸             0.05g          甘氨酸 0.2g
盐酸吡哆醇（VB6） 0.05g
配成1L母液，倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。
（4）配制MS铁盐母液
一般配制成100倍MS铁盐母液。依次称取
EDTA二钠 3.73g
FeSO4•7H2O 2.78g
注意：
FeSO4和Na2-EDTA 应分别加热溶解后混合，并置于加热搅拌器上不断搅拌至溶液呈金黄色(约加热20 - 30 min)，调pH值至5 .5，室温放置冷却后，再冷藏。配成1L母液，倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。
所以MS母液有5种大量元素母液，加上MS微量元素母液、MS有机母液和MS铁盐母液，共8种母液。
5激素母液的配制
各种生长素和细胞分裂素要单独配制，不能混合在一起，生长素类一般要先用少量95%的酒精或1当量的NaOH溶解，细胞分裂素一般要先用1当量的盐酸溶解，然后再加蒸馏水定容。一般取100mg配成100ml母液。
二.配制培养基
以配置1L MS培养基为例，按顺序进行如下操作：
（1）先在烧杯中放入一些蒸馏水。
（2）分别取上面八种母液10ml倒入。
（3）一般称取30g蔗糖倒入，搅拌溶解。
（4）加蒸馏水用量筒定溶至1L。
（5）按设计好的方案添加各种激素，由于激素的用量很小，而且激素对组培植物的生长至关重要。所以有条件的话最好用微量可调移液器吸取，减少误差。
（6）用精密试纸或酸度计调整PH至5.7-5.8。（有条件的话使用酸度计，比较精确）可配1当量的HCL和1当量的NaOH用来调溶液PH值。
1当量HCL配制：用量筒量取8.3ml配成100ml溶液。
1当量NaOH配制：称取NaOH 4g 配成100ml溶液。
（7）称取5g左右琼脂粉（质量好的琼脂粉),倒入上面配好的溶液中，放在电炉上加热至沸腾，直到琼脂粉熔化。
（8）稍微冷却后，分装入培养容器中。无盖的培养容器要用封口膜或牛皮纸封口，用橡皮筋或绳子扎紧。
（9）放入消毒灭菌锅灭菌，灭菌20分钟左右。
（10）灭菌后从灭菌锅中取出培养基，平放在实验台上令其冷却凝