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菜鸟难当

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 42.5
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帖子: 26
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虫号: 994759
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[交流] 【求助/交流】ISSR引物扩增产物电泳图，求助各位高手~~~ 已有8人参与

大家好~下图是我用ISSR引物扩增产物的电泳图。。。
三幅图的扩增体系都是一样的（除引物外）
我试了二十几个引物了，只有第一副图的这个引物条带清晰，其它的根本分不清条带，请教高手们分析原因~多谢，多谢，多谢

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1楼 2010-10-29 16:22:45

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

火箭天使

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
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帖子: 2
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虫号: 3402363
注册: 2014-09-06
性别: GG
专业: 细胞信号转导

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

亲，你用的是同一个PCR程序的吧，是这样的，ISSR标记每条引物的退火温度是不同的（可以根据序列计算一下理论退火温度），所以最终导致每一个引物扩增的结果有所差异，你用的这个退火温度能扩增出清亮、多态性好就说明这个温度是该引物的最适退火温度，相反其他的不好就不是她的最适退火温度。另外每条引物由于序列不同在基因组的退火位点的位置和数量也是不同的，退火为点多的扩增出的条带理论上就多，少或没有的就条带少不清晰或没有条带。