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tian1203

银虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】双酶切求助

用fermentas公司的Kpn1和Xho1双酶切Pmd-t18simple上的目的片段
只是普通酶,没有通用Buffer,所以分步酶切
第一步:
                    2ul       10X TangoBuffer
                    2ul        Kpn1
                    10ul      质粒
                    6ul        ddH2O
            37度5h


第二步:
                 6ul      10X TangoBuffer
                 2ul        Xho1
                 12ul     ddH2O
             37度5h      

出现的问题:2个月前可以切下550bp的片段
                      现在相同的方法350bp,550bp,900bp,1200bp,1700bp却啥也且不下来。请求帮助
                  根据fermentas公司的建议方法也没切下来。

小弟实验新手,恳求各位帮助,或者关于双酶切的任何建议
不胜感激!
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别紧张,我不是什么好人...
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tian1203

银虫 (著名写手)

★ ★
scelab(金币+2):欢迎上图 2010-10-28 23:04:22

把酶从原来的2ul减少到1.8ul,第二个片段550的切了下来,但是为啥效果不好?
第一个350bp和第三个1200bp的片段,同样的酶切位点为何且不下来?

每步都是37度5h,是时间太短还是酶加多了甘油抑制了酶活性,还是其他原因?

实验新手请求帮助!非常感谢!
别紧张,我不是什么好人...
9楼2010-10-28 22:37:47
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷


tian1203(金币+1):谢谢参与
tian1203(金币+2): 2010-10-28 11:22:04
用Fermentas的快酶吧,所有的酶buffer都通用的。
Thank-you,so-blue.
2楼2010-10-28 11:14:01
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tian1203

银虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2010-10-28 11:14:01:
用Fermentas的快酶吧,所有的酶buffer都通用的。

我问了价格,比普通的贵很多。现在还有很多普通的酶没用完。
FastDigest®限制酶效果真的那么神奇吗?
别紧张,我不是什么好人...
3楼2010-10-28 11:25:27
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silicare

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tian1203(金币+1):谢谢参与
tian1203(金币+2): 2010-10-28 13:27:13
公司没有推荐双酶切的buffer ?
4楼2010-10-28 11:42:21
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