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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】连接产物电泳
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更深的蓝

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】连接产物电泳


如图，由于孔道有限，没点P双酶切后PCR产物的样，连接产物最下面的一条带就是PCR产物的条带。不知道算不算连接上了。

[ Last edited by 更深的蓝 on 2010-10-28 at 10:30 ]
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低调务实！
1楼 2010-10-28 10:28:59
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charles08

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by jackiechubut at 2010-10-29 23:50:20
连接产物一般无法直接这样电泳判断的，毕竟有连接上的，有未连接上的，到分子级别，一般电泳是无法检测的。还是转入大肠杆菌中检测筛选出克隆比较好

我的是连接出来后转化出了斑，挑斑和摇菌菌液都能得到目的基因的扩增带。但是提取的质粒PCR结果无目的基因带，酶切后条带也不理想。重复了两次还是一样，不知原因？
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17楼2013-06-08 16:32:13
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hyw1989960

木虫 (正式写手)

快乐家族二十八
更深的蓝(金币+1): 2010-10-31 14:32:07
看不懂你的图，一般验证方法是将连接产物转化大肠杆菌，挑阳性克隆，再提质粒做PCR验证和酶切验证
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快乐家族
2楼2010-10-29 22:03:31
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jackiechubut

木虫 (小有名气)
★
dhd997(金币+1):鼓励交流。 2010-10-30 11:02:32
更深的蓝(金币+1): 2010-10-31 14:32:12
连接产物一般无法直接这样电泳判断的，毕竟有连接上的，有未连接上的，到分子级别，一般电泳是无法检测的。还是转入大肠杆菌中检测筛选出克隆比较好
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一笑寂寥空万古，三分明月照大江
3楼2010-10-29 23:50:20
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路人甲007

木虫 (正式写手)

小七
★
dhd997(金币+1):很活跃，鼓励。 2010-10-30 11:02:41
更深的蓝(金币+1): 2010-10-31 14:32:15
跑胶一般不好确定
要想真正的确定的话 转化挑克隆 菌落PCR  测序
赞一下(1人) 回复此楼
与人玫瑰手有余香
4楼2010-10-30 09:44:26
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