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wangqisui520

木虫 (著名写手)

健康生活快乐科研

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[交流] 【求助/交流】细胞计数已有2人参与

我是学化学的，做实验用到了些大肠杆菌，现在审稿人给了其中一个意见：The cell count should be reported in section 2.4，我该怎样回复呢？因为不知道在文章中怎么描写细胞计数这个东西，做实验也没有用过的，请各位大侠给点意见，指导一下，谢谢啦。

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不抛弃，不放弃，微笑的面对艰难的生活！

1楼2010-10-26 20:27:28

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yanghai01

木虫 (正式写手)

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★
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细胞计数法
细胞计数法是用来计数细胞悬液中细胞数量的一种方法。一般利用计数板（血球计数板）进行。即可用于分离（散）细胞培养接种前计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，也可用于对培养物的细胞数量进行计数。不论计数的对象如何，均须制备分散的细胞悬液。
1、制备细胞悬液
对于悬液培养的细胞，可直接进行下面的步骤2（计数与计算过程）。如果计数对象为贴壁生长的细胞，首先需将培养物制备成细胞悬液。
1）终止培养，将培养液吸出，用PBS洗培养物一次。
2）给培养瓶内加入1ml 0.25％胰蛋白酶溶液，于37℃消化3～5min 。期间不断在镜下观察。当细胞变圆接近脱壁时，弃消化液。
3）加入一定量的培养液（如果这些培养细胞不再有用，可加PBS），用吸管吹打，使细胞脱壁而制成细胞悬液。
2、计数与计算过程
1）在细胞计数板中央放置计数专用的盖玻片。
2）用玻璃虹吸管吸取细胞，让虹吸管在盖玻片上或下侧的计数板凹蹧处流出悬液，至盖玻片被液体充满为止。
3）置显微镜下计数四角大方格内的细胞总数。对于压线的细胞只计数在上线和左线者，对于细胞团按单个细胞计数。
4）按下式计数细胞悬液的密度：
细胞密度＝（4个大格细胞总数/4）×104个/ml