应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【转帖】关于细菌超声破碎的一些经验总结
141/2返回列表12下一页
查看: 5400  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

hopebiolqdhb

金虫 (著名写手)

[交流] 【转帖】关于细菌超声破碎的一些经验总结 已有13人参与

细菌工程菌胞内表达主要分为两种形式，一种是在强启动子条件下的高效表达，由于蛋白的过度表达，使蛋白不能及时有效折叠而发生无规则卷曲，以固体颗粒的形式堆积于胞间质中，这就是所说的包涵体，另外一种是间质内的可溶性表达，即可以发生正常折叠，具有生物活性。一般情况下，细菌只要被正常破壁就可以通过离心的形式将包涵体和可溶性表达的蛋白分离开。   

超声破碎的条件一般是300w，10s/10s，20分钟，具体条件可根据自身情况而定。

超声前菌体的准备：菌液离心后，先用PBS将菌沉淀洗2-3遍，然后按原菌液体积的1/5-1/10加入裂解液重悬菌体，裂解液的成分：50mMTris-HCl, pH8.0, 2mM EDTA，100mM NaCl，加溶菌酶至100ug/ml，0.1%Triton X-100。切记冰浴超声！
如何判断是否超声完全：根据网友的经验，一般有以下几个方面：
1，外观判断：超声前菌悬液是浑浊的，超声完全后变的透明、清澈。
2，液体的粘滞性：超声后菌液从枪头滴下不粘连。  
3，高速离心：有用高速离心检测超声破碎程度的（一般用6,000 g 10 min, 比一般离心收集菌体的转速高一点）。 沉淀是未破碎或破碎不完全的菌体。
4，染色：破碎后的菌液涂片，革兰氏结晶紫溶液染色0.5分钟，镜检。
超声后加入核酸酶消除核酸对蛋白的污染。
一些需要注意的问题：
1，蛋白以包涵体形式表达，追求的是高破碎率，要求细胞碎片很小，而另一种蛋白是可溶形式表达，所以细胞碎片不能很小，两种情况要求不同但目的相同，都是便于后期的固液分离。
2，如果超声时出现黑色沉淀，说明超声功率太强。
3，超声时间太长、功率太高对蛋白活性肯定有影响。
4，尽量防止泡沫的产生。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

超声破碎

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
培养基
1楼 2010-10-18 10:03:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

microxy
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
谢谢分享！
2楼2010-10-18 14:54:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

happyever

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
收藏了，很好，谢谢分享
回复此楼
为了明天，今天就要开始奋斗！
3楼2010-10-18 15:20:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cheauyn

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
实用，很好
回复此楼
4楼2010-10-18 16:14:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangwei1894
5楼2011-08-21 10:31:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sxx2436

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
请问各位：长期超声破碎对人体危害吗？
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-08-28 13:06:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cherryli1202

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
刚好要用~谢谢了～！
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2011-08-29 18:55:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ghsdmxx

新虫 (小有名气)
已收藏，谢谢
回复此楼
你只要相信自己所走的路，大步向前就好
8楼2011-08-31 09:02:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

无踪无影

金虫 (小有名气)
лл
回复此楼
一切皆有可能
9楼2012-06-27 14:49:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

双双lucy

铁虫 (正式写手)
谢谢 很好
回复此楼
10楼2013-03-22 18:01:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hopebiolqdhb 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-09-02 00:19 by xiangy672
[基金申请] 面上函评意见出来了，像什么等级？ 20+4 Tsingking1 2026-08-27 17/850 2026-09-01 19:51 by 超级无敌华子
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 7/350 2026-09-01 15:18 by myrtle
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上） +7 gdd2018 2026-08-28 12/600 2026-09-01 08:32 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +6 叶九微 2026-08-26 6/300 2026-08-31 23:54 by yudaoqian88
[基金申请] 国社科又开始会评了，不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[基金申请] 哪位高人中了，把查询到的截图贴出来让我看看，让我长长见识 +6 yuleib84 2026-08-26 7/350 2026-08-31 19:46 by 鱼翔浅底1
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 能否申诉？ +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭