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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 【求助】虫友们有用过氨基柱的吗？了解的请帮忙看一下。
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whynotbest

至尊木虫 (职业作家)

淫虫

[交流] 【求助】虫友们有用过氨基柱的吗？了解的请帮忙看一下。

小弟目前准备用氨基柱跑HPLC，自身不是分析专业的，对HPLC什么的知之甚少，这根氨基柱也挺贵的，不敢轻举妄动，故特意发帖求助一下版里的各位高手。
有相关经验的虫友多多指教啊。

柱子的相关参数如下图：



我上官网想查一下使用说明，可是没有查到。

我跑液相时的条件大概是乙腈：水=97:3

柱子包装盒上写的是此柱子用正己烷：乙醇=95:5保存

有什么注意事项呢？请各位不吝赐教啊。
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WorkFinishPublish
1楼2010-10-15 16:48:01
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fyp05596768

金虫 (小有名气)
氨基柱是同时可以用于正相条件和反相条件的这一点很多用户都已经知道；但是要注意到的是：正相溶剂和反相溶剂往往是不互溶的，对这一点的忽略可能会带给使用者一些麻烦。

对于新购买到的柱子，首先请注意打开分析测试说明书，了解柱子的保存溶剂。如果保存溶剂与你将要使用的流动相极性不同不会互溶，请先用异丙醇过渡。过渡过程中注意因异丙醇粘度较大，会导致柱压很高，适当调低流速即可。如果要使用的流动相中还含有缓冲盐类，建议在用分析流动相之前，先用不含缓冲盐的同比例流动相过渡，这样可避免缓冲盐在分析柱内的析出。

柱效检测：

我用于判断一个用户是否有经验的指标之一，是用户是否习惯配制一些柱效检测标准溶液。说到柱效检测，我可以向大家提供一个方法，而且很通用，你也可以用同样的标准溶液和流动相来检测硅胶柱和氰基柱。
流动相：
10％乙酸乙酯＋90％正己烷 流速1.0
标准溶液：
乙苯（如乙苯找不动就用甲苯代替呗）＋苯甲酸甲酯
检测波长254nm

这个方法特别适用于新购柱子（新购柱子往往保存在正相溶剂中）时即进行检测，如有问题，可及时与供应商沟通。也适合在柱子在准备放置相当长一段时间之前进行充分清洗后进行检测作为记录留档。在平常的使用过程中，如果分析物是固定重复的，我们当然可以从对分析物的分离分析情况来作出判断；但如果分析物和分析条件不同时，定期检测柱效可以避免柱效下降导致分离不佳再分析查找原因这样浪费人力物力的过程。不过特别要注意的是，当氨基柱（或氰基柱）在反相条件中使用时，如用该条件检测，请注意流动相的换相过渡问题。

氨基柱的使用：

需要注意的是，氨基柱的键合官能团氨丙基要比C18,C8柱的键合官能团C18,C8要容易水解，所以首先要做好其使用寿命稍逊的心理准备，特别是当你的使用条件是反相条件下时。

反相条件下使用时，要特别注意控制PH值范围，PH值越低越有发生水解的危险，流动相中水的比例越高当然也越有发生水解的危险。所以，在使用后以及准备长时间放置该柱时，必要的清洗和将氨基柱保存于纯的有机溶剂中是很好的保养措施。

有一种情况是，当使用氨基柱进行酸性物质如果汁的分析时（分析其中的糖份），酸性物质的存在意味着质子的存在，可能会使略带负电荷的氨基官能团质子化，导致使用一段时间后对于某些类的分析物保留性质有所改变或表现在柱效下降。这时，Kromasil专家所给的建议是：用5-10倍的柱体积的含0.5-1.0％NH3的50-50乙腈-水溶液冲洗该柱（冲洗后当然要再用不含碱的流动相洗去多余氨），之后再进行分析这类酸性分析物时建议在流动相中略微添加少许氨如0.1％。

氨基柱的清洗

简单说起来，正相条件下使用的氨基柱你就参照硅胶柱的清洗方法；反相条件下使用的氨基柱你就参照C18的清洗方法。

平时在正相条件下使用：

首先用50倍柱体积的异丙醇清洗，因异丙醇粘度较大可适当放低流速；之后，用50倍的甲醇清洗；之后，用异丙醇过渡回到平常使用的正相流动相，即可。
平时在反相条件下使用：

缓冲盐应及时冲洗，以及不能直接用纯甲醇冲洗缓冲盐等，属常识就不作特别交待了。

用50倍纯甲醇冲洗；之后，用异丙醇过渡后，用二氯甲烷冲洗色谱柱；之后，再用异丙醇过渡回来到甲醇条件下。

这些清洗方法，主要是针对当样品中有杂质逐步吸附累积到填料上时的处理方法，色谱柱表现行为为诸如柱压增高柱效降低等LUNA氨基柱的使用方法

1. 氨基柱既可以正相使用，也可以反相使用，但是要注意到的是：正相溶剂和反相溶剂往往是不互溶的，正常情况新氨基柱保存在正相环境中，例如LUNA
氨基柱保存在正己烷-乙腈（99：1）中。

2. 正相使用

2.1 新柱子可直接用流动相。推荐先用正己烷-乙腈（99：1）以0.5ml/min的流速冲10倍柱体积，再根据流动相选用极性相近的氯仿或二氯甲烷以相同的流速冲10倍柱体积，最后换成流动相。

2.2 正相使用时，不宜分析含醛基、羰基的化合物，不可用于还原糖的分析；流动相要彻底脱气，并不得含有羰基化合物和过氧化物（质量不好的乙醚、四氢呋喃含有少量）。

2.3 任何时候更换流动相时都要确保新流动相与柱子原保存液可互溶。

3 反相使用

3.1 先用正己烷-乙腈（99：1）以0.5ml/min的流速冲10倍柱体积，再依次以相同的流速相同的用量用氯仿、异丙醇、甲醇、甲醇-水（50：50）冲柱子。

3.2 以0.5ml/min的流速用30倍柱体积的pH11.0的氢氧化钠（LUNA）水溶液冲柱子（注意pH值切不可超过11.0），立即用水（ 0.5ml/min的流速，30倍柱体积）冲洗，再换成流动相。

3.3 配制流动相时，应各组分分别量取，比例较小的组分要精密量取，需调pH值时要精密到0.1。

3.4 反相条件下使用时，要特别注意控制pH值范围，pH值越低越有发生水解的危险，流动相中水的比例越高当然也越有发生水解的危险。最理想的pH范围在pH 3.0-7.0

3.5 如果要使用的流动相中还含有缓冲盐类，建议在用分析流动相之前，先用不含缓冲盐的同比例流动相过渡，这样可避免缓冲盐在分析柱内的析出。

3.6 有一种情况是，当使用氨基柱进行酸性物质的分析时，酸性物质的存在意味着质子的存在，可能会使略带负电荷的氨基官能团质子化，导致使用一段时间后对于某些类的分析物保留性质有所改变或表现在柱效下降。建议：用5-10倍的柱体积的含0.5-1.0％NH3的乙腈-水(50:50)溶液冲洗该柱（冲洗后当然要再用不含碱的流动相洗去多余氨），之后再进行分析这类酸性分析物时建议在流动相中略微添加少许氨如0.1％。

4 色谱柱的冲洗：简单说起来，正相条件下使用的氨基柱就参照硅胶柱的清洗方法；反相条件下使用的氨基柱就参照C18的清洗方法。

5 色谱柱的保存
              
5.1 正相使用时，将柱子冲洗干净后，用正己烷-乙腈（99：1）保存。

5.2 反相使用时，如短期不用，可用甲醇或乙腈保存；长期不用时需将甲醇依次用异丙醇、氯仿置换，最后用正己烷保存。

6 色谱柱的再生

6.1 方案1：依次用甲醇、异丙醇、氯仿、正己烷、氯仿、异丙醇、甲醇冲柱子（各以0.5ml/min的流速，20倍柱体积），再换流动相。这些清洗方法，主要是针对当样品中有杂质逐步吸附累积到填料上时的处理方法，色谱柱表现行为为诸如柱压增高柱效降低等。

6.2 方案2：NH2柱用于反相条件时，NH2键会水解，尤其是在该柱子pH范围以外，在极端酸性和碱性条件下柱寿命会下降很快，如果在这个条件下使用需要清洗一下，需要用10倍柱体积溶液冲洗，如下：

95％水/5％乙腈
THF四氢呋喃
95％乙腈/5％水
并保持95％乙腈/5％水继续冲洗，以低流速0.2-0.5mL/min过夜冲洗。

6.3 方案3：柱子使用一定时间后，柱效下降，老化，也可清洗一下柱子恢复柱性能,清洗时依次用10倍柱体积的下列溶液冲洗：

95％水/5％乙腈
THF四氢呋喃
95％乙腈/5％水

再走流动相即可
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2楼2010-10-16 12:07:09
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wangxindream

金虫 (正式写手)

请教,关于色谱柱的使用 维护您平时是通过那些途径学习的

引用回帖:
Originally posted by fyp05596768 at 2010-10-16 12:07:09:
氨基柱是同时可以用于正相条件和反相条件的这一点很多用户都已经知道；但是要注意到的是：正相溶剂和反相溶剂往往是不互溶的，对这一点的忽略可能会带给使用者一些麻烦。

对于新购买到的柱子，首先请注意打开分 ...

内容如上,谢谢推荐
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3楼2010-10-16 12:35:57
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whynotbest

至尊木虫 (职业作家)

淫虫
谢谢楼上两位
能否再结合我的具体情况帮我看看呢
我的柱子保存条件是正己烷：乙醇=95：5
我跑液相时的条件大概是乙腈：水=97:3
一开始需要如何过渡呢？
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WorkFinishPublish
4楼2010-10-16 20:52:30
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whynotbest

至尊木虫 (职业作家)

淫虫
顶一下，希望有更多高手相助啊
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WorkFinishPublish
5楼2010-10-18 18:12:18
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cl3870562

金虫 (正式写手)
结合我的使用经历，我用的时候是在甲醇：水=3：7的条件下用的，柱子最开始用的正己烷来封的，我使用异丙醇，低流速来过渡的，大概用了柱子体积的5倍量，进而用甲醇来过渡，最后选到我用的那个条件来做。乙腈和甲醇的中间过渡液应该一样吧。
如果不放心，可以给柱子的代理打电话询问。
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6楼2010-10-18 18:38:56
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zxjml2526

铁虫 (初入文坛)
★
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我用氨基柱做门鸟，反相使用，新柱子用异丙醇过渡，不接检测器的情况下冲洗3~5小时，再用50%的乙腈冲柱子2小时左右，然后换上流动相平衡，用过之后，用50%的乙腈冲洗柱子，用90%的乙腈保存柱子！
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7楼2011-12-21 17:12:28
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jianhuilcn

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
氨基柱可以正相，也可以反相，你现在的氨基柱使用正相流动相保存的，97%乙腈是反相流动相，正反相过度用异丙醇就好了，不过注意柱压，柱压不要太高了，异丙醇黏度比较大，会造成比较大的柱压。另外氨基柱在水相不稳定，水的比例不宜过大，我个人觉得不要超过30%的水吧，你的流动相3%的水是没有问题的。
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8楼2012-02-01 21:22:38
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yugijiang

木虫 (著名写手)
用异丙醇过度
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9楼2012-07-01 08:36:12
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苗苗mm

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
1177880楼: Originally posted by fyp05596768 at 2010-10-16 12:07:09
氨基柱是同时可以用于正相条件和反相条件的这一点很多用户都已经知道；但是要注意到的是：正相溶剂和反相溶剂往往是不互溶的，对这一点的忽略可能会带给使用者一些麻烦。

对于新购买到的柱子，首先请注意打开分析 ...

非常好！感谢
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10楼2012-12-25 23:23:01
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