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zhangpeipei

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】蛋白纯化后可不可以不除咪唑直接送公司做抗体 已有3人参与

请问,
我纯化的重组蛋白保存到缓冲液中,其中含有50mM的NaH2PO4,300mMNacl以及250mM的咪唑当中,PH为8.0。
可是我在透析除咪唑的时候蛋白出现了沉淀,暂时无法解决,请问我们可不可以直接将未透析的蛋白溶液直接发给公司制备抗体,如果是蛋白沉淀的话是否可以直接做抗体。 先谢谢各位了!
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zhangpeipei

新虫 (初入文坛)

amisking:严禁纯表情发帖! 2010-10-07 16:39:14
2楼2010-10-07 13:30:23
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+2):鼓励交流! 2010-10-07 16:39:19
如果不透析是可以直接做抗体,但是可能兔子会有反应或者没有反应,兔子听超耐受的
但是透析之后出现沉淀,那说明蛋白变性了。你可以离心去除沉淀之后看下上清中蛋白浓度还有多少。然后你需要的抗体是针对线性表位的还是空间表位的。如果要是线性表位的话沉淀了也是可以免疫的。但是空间表位的话 那就不需要沉淀部分。
52187644
3楼2010-10-07 16:06:54
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lwh_xp

木虫 (初入文坛)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+3):鼓励分享经验! 2010-10-07 16:39:29
我的情况和你一样,在浓缩时蛋白发生沉淀,可以建议你一下:1.直接打兔子老鼠(我就是这么干的,影响不大);2.跑完SDS-PAGE后,切胶,捣碎之后直接用于做抗体。
xp是坏蛋!
4楼2010-10-07 16:19:03
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zhangpeipei

新虫 (初入文坛)

谢谢各位了!
5楼2010-10-09 10:46:15
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