应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】酵母表达外源蛋白，His-tag降解怎么办
51/1返回列表
查看: 2126  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

zheng20089829

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】酵母表达外源蛋白，His-tag降解怎么办

最近在毕赤酵母中表达一个40kd左右的蛋白，电泳发现有两条带，且随着时间的延长，底下那条带不断变浓，上面的带基本没有变化，用镍柱纯化吸附的只是上面的带，下面的带基本全部穿透，但测活性都有，且穿透峰活性更高，请教各位是不是由于组氨酸尾降解造成的，有什么方法可以避免。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白表达纯化鉴定精华

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-10-07 10:44:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

梦想天行
★
zheng20089829(金币+1): 谢谢参与
，

发自小木虫Android客户端
6楼2016-10-16 00:35:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

181587941

金虫 (正式写手)

提供几个防止降解的办法

★ ★ ★ ★
zheng20089829(金币+1):谢谢参与
lstt09nk(金币+3):感谢参与~ 2010-10-07 13:17:55
目的蛋白可能是降解了。防止的方法有以下几个：
一、低温表达，可控制诱导温度在22度到25度，具体的可以摸索一下
二、找一个合适的ph，我们表达的时候发现ph超过6很容易降解。
三、发酵过程中加入蛋白酶抑制剂
四、构建菌株时破坏掉蛋白酶的基因。

如果实在没办法，就想办法提高表达量，缩短诱导时间。
赞一下(3人) 回复此楼
3楼2010-10-07 12:13:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lulu1986

捐助贵宾 (小有名气)
★
zheng20089829(金币+1):谢谢参与
这两个带差别很大吗？六个his标签才有多大的分子量，如果能够明显区分，那么肯定不是标签降解的原因！
赞一下(1人) 回复此楼
Nothingisimpossible!
4楼2010-10-08 20:11:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zheng20089829

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lulu1986 at 2010-10-08 20:11:18:
这两个带差别很大吗？六个his标签才有多大的分子量，如果能够明显区分，那么肯定不是标签降解的原因！

差别还是明显的，但下面的带完全不会吸附~现在也不是很清楚什么原因
赞一下 回复此楼
5楼2010-10-09 12:55:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 8/400 2026-08-30 12:03 by l0VvVHGBGRLv
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +8 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 9/450 2026-08-30 11:40 by l0VvVHGBGRLv
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 8/400 2026-08-30 11:32 by l0VvVHGBGRLv
[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 9/450 2026-08-30 11:19 by l0VvVHGBGRLv
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-30 11:18 by l0VvVHGBGRLv
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-30 11:07 by l0VvVHGBGRLv
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-30 06:22 by ZPa0EcMwuECS
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-30 02:09 by ZPa0EcMwuECS
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-30 01:45 by ZPa0EcMwuECS
[考博] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-30 01:34 by ZPa0EcMwuECS
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +4 349506619 2026-08-28 4/200 2026-08-29 22:41 by alongwaytogo
[基金申请] 国社科申报系统有变化 +3 kynobel 2026-08-23 3/150 2026-08-29 21:57 by 余韵清
[教师之家] 导师吐槽：我怎么摊上了这么个极品研究生！ +9 苏东坡二世 2026-08-23 9/450 2026-08-29 14:41 by hustersqt
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 国合现在查不到了吗？ +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭