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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】TA克隆
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lij2

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】TA克隆已有2人参与

我用的载体是PGM-T，3000多bp，连的也是3000多bp的一段基因，是胶回收的，没有其他片段。可是挑白色菌落提出的质粒单酶切电泳只有4000多bp。请教高人，是怎么回事啊？
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1楼2010-09-26 17:18:43
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oyanxuelai

银虫 (小有名气)
lij2(金币+1): 2010-09-28 21:49:43
有可能是连接上载体.但是你的载体和目的基因可能含有多个酶切位点.你用的酶所识别的酶切位点有很多个,虽然单酶切,其结果会切成一个4000片段和好多个小片段!而小片段可能在电泳中看不到的
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7楼2010-09-27 11:19:02
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diaoyuhua

金虫 (小有名气)
生物实验有时很诡异，重复次试试
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2楼2010-09-26 17:33:25
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shan-sa

金虫 (正式写手)
偶前几天刚连了个3000的，挺好滴，楼主看看单酶切的位点是不是出了问题
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4楼2010-09-26 19:57:34
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oyanxuelai

银虫 (小有名气)
★ ★
amisking(金币+2):鼓励交流！ 2010-09-26 20:19:15
你那目的基因是用PCR扩出来吗?如果是的话,用tag酶扩的直接连接上载体就行;若用高保真的,则要加A尾巴,再连上载体!载体本身也可以自连.虽然做转化后长出菌,然后提质粒,再酶切,一般会出现两种情况:一种载体自连;一种是载体与目的基因连接上的.
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5楼2010-09-26 20:01:20
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