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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】各位大侠，我的目的蛋白没有专门的抗体，如何检测它在大肠杆菌中的表达?
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dqvictory

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】各位大侠，我的目的蛋白没有专门的抗体，如何检测它在大肠杆菌中的表达? 已有10人参与

各位大侠，小弟我要把的目的基因连接到载体上后，转化至大肠杆菌，观察其对大肠杆菌表型的影响。但这个蛋白没有专门的抗体，那如何检测它是否表达了呢？用标签抗体吗？具体要如何操作呢？谢谢各位了！

[ Last edited by dqvictory on 2010-9-25 at 18:12 ]
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把记忆随身携带！
1楼 2010-09-25 18:10:07
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+1):谢谢参与 2010-09-26 08:32:51
看你的重组蛋白用什么标签，用标签抗体先检查。如果后续还需要针对蛋白的检查，那就必须制备一个抗体。
另外你的蛋白如果有其他方法可以检测的话，也可以试试
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52187644
2楼2010-09-25 19:32:37
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snowice

银虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+1):有道理~ 2010-09-26 08:33:03
带上融合标签啊，用标签抗体做western，注意一下大小就行了
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爱吃爱睡懒得要死的猪头
3楼2010-09-25 21:56:17
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dqvictory

铁虫 (小有名气)
谢楼上二位了，谢谢!请问具体点的操作方法是什么呢？拜托啦！自己外行，不知道如何着手，麻烦各位帮忙了！
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把记忆随身携带！
4楼2010-09-25 22:06:31
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beibei9535

荣誉版主 (职业作家)

晕晕小版主~ 姑娘你好！

优秀版主优秀版主
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+1):谢谢参与，标签太多了~ 2010-09-26 08:33:44
引用回帖:
Originally posted by dqvictory at 2010-09-25 18:10:07:
各位大侠，小弟我要把的目的基因连接到载体上后，转化至大肠杆菌，观察其对大肠杆菌表型的影响。但这个蛋白没有专门的抗体，那如何检测它是否表达了呢？用标签抗体吗？具体要如何操作呢？谢谢各位了！

...

一般就是使用组氨酸标签咯，然后挂柱子，然后收集峰值的去做western
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最好的年龄是，那一天，终于知道并且坚信自己有多好，不是虚张，不是夸浮，不是众人捧，是内心明明澈澈知道：是的，我就是这么好。
5楼2010-09-26 00:31:36
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nrzhw
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
感谢分享
6楼2010-09-26 00:56:47
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dqvictory

铁虫 (小有名气)
★
silicare(金币-1):专业讨论帖，严禁纯表情回复 2010-09-26 12:22:14
7楼2010-09-26 11:21:02
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dqvictory

铁虫 (小有名气)
还有没有前辈指点下，小子拜谢啦！
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把记忆随身携带！
8楼2010-09-27 10:05:36
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zhy19850501

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你用的什么载体呀，要是这载体上有组氨酸标签的话，你就可以在蛋白电泳后直接做western blot检测。
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9楼2010-09-27 10:30:32
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banhf

新虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+1):方法之一 2010-09-27 12:01:06
目的蛋白的大小知道吧？以宿主菌做对照，跑SDS-PAGE电泳，可以进行大致的判断
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10楼2010-09-27 10:42:37
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