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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 天然药物化学 » 【求助】HPLC梯度洗脱如何改进让峰分离更好
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lyn_zoe

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助】HPLC梯度洗脱如何改进让峰分离更好 已有17人参与


上面是我做的高效液相色谱分析样品的结果
梯度洗脱程序：流动相甲醇和水
0-5min 68%-70%甲醇
5-15min 70%-75%甲醇
15-40min 75%甲醇
41-45min 68%甲醇
流量1ml/min 254nm 30摄氏度柱温 进样量10微升
分析仪器是安捷伦1100 柱子ZORBAX Extend-C18液相色谱柱
样品里面成分较多，很难实现分离，希望对HPLC有经验的大侠给与意见或建议，小女子万分感谢！
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1楼 2010-09-15 16:53:38
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heliang1007

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lyn_zoe at 2010-09-16 15:30:01:

呵呵谢谢，三氟乙酸如何？

我没有用过三氟乙酸，我有个朋友做指纹图谱用的0.1%的磷酸，我看过图谱，还比较漂亮
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16楼2010-09-16 15:38:03
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Cpuli87

木虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
Originally posted by lyn_zoe at 2010-09-16 15:30:01:

呵呵谢谢，三氟乙酸如何？

可以的，一般万分之五-八吧！我们用了后，峰型相当的好！
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17楼2010-09-16 16:22:33
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普通回帖

清凉之水

木虫 (小有名气)
★ ★
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karl2100(金币+1):谢谢回帖！ 2010-09-15 23:58:01
梯度的跨度有点小，刚开始时，甲醇的比例调整为50％试试
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2楼2010-09-15 20:24:10
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lyn_zoe

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 清凉之水 at 2010-09-15 20:24:10:
梯度的跨度有点小，刚开始时，甲醇的比例调整为50％试试

谢谢，相应的时间都要延长了吧？
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3楼2010-09-15 21:08:37
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jiaoyuanming

至尊木虫 (著名写手)
★
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从梯度上考虑，柱子的温度，溶剂的选择。
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4楼2010-09-15 21:13:20
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jiaoyuanming

至尊木虫 (著名写手)
★
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xiaodu2007693:编辑内容 2010-09-15 23:47
溶剂是选甲醇，水；或者乙腈水：梯度变化选择1，或者其他，走几样品就会有感觉的，柱温可以加十度试一试。等等，考察条件，你先从0-100%走一针看一下。

[ Last edited by xiaodu2007693 on 2010-9-15 at 23:47 ]
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5楼2010-09-15 21:16:54
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xiaodu2007693

木虫 (著名写手)

药学版~龙猫
★ ★
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karl2100(金币+1):3Q 2010-09-15 23:58:14
起始甲醇浓度有点高，建议调低
时间相对长一些，你这25分钟就出完了，太快
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欢迎您来药学版~
6楼2010-09-15 23:48:17
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大痴兔

新虫 (初入文坛)
★
karl2100(金币+1):谢谢！ 2010-09-15 23:58:25
梯度有点小，增加水的比例，必然保留时间延长，峰也会拉开。
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淡泊明志，宁静致远。
7楼2010-09-15 23:55:50
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zhjh1978

木虫 (正式写手)
★
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也可以把流量调小吧.
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8楼2010-09-16 00:14:17
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zhjh1978

木虫 (正式写手)
程序升温
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9楼2010-09-16 00:15:13
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wzf841006

木虫 (著名写手)
★ ★
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xiaodu2007693(金币+1):谢谢交流 2010-09-16 01:12:39
甲醇浓度降低，保留时间往后，有利于分离。或者改成乙腈加酸试一下，或者甲醇加酸试一下，从图谱上看，峰大多拖尾啊
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看风
10楼2010-09-16 01:10:48
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