| 查看: 3012 | 回复: 11 | |||
yujiaping1木虫 (著名写手)
|
[交流]
【专题】引入酶切位点的引物设计问题
|
||
|
为了跑原核表达设计5‘端加酶切位点的引物 原始引物根据pcr引物设计基本原则设计好了 在加酶切位点的时候烦心了 因为引物要加Not I酶切位点结果引入了8个GC 造成总引物GC含量超过72%，为了配平GC含量于是引进若干TA结果又造成这个引物过长 引物总退火温度升到80多。 我知道引物设计时退火温度是不考虑5’端附加序列的，但是前几个循环之后这些附加是作为引物匹配序列存在的，不能完全无视之吧？ 为了防止新的错配出现（前几个循环之后）是否要相应的提高一下退火温度呢？ 但是似乎在几个循环之后，带有引物序列的模板已经成为优势模板，似乎退火温度又对它影响不大。。。 真是斩不断理还乱 我是刚刚接触这方面，关于5‘端修饰的pcr引物设计及PCR条件设定，能否请行家指点一二 ？ |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有201人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 设计引物时，如何加酶切位点和信号肽？
已经有6人回复
- 引物酶切位点设计问题
已经有4人回复
- 请教pcDNA3.1上酶切位点的问题
已经有6人回复
- 原核表达引物设计求助~
已经有5人回复
- 引物设计时酶切位点的添加。
已经有4人回复
- 引物酶切位点问题
已经有23人回复
- 关于PCR引物中加入酶切位点的设计方法和酶切问题！ 新手，求帮忙！！
已经有4人回复
- 求助设计引物时酶切位点保护碱基的问题
已经有19人回复
- 大侠们，帮我看一下这对引物的酶切位点是什么？
已经有20人回复
- 求助带酶切位点的引物设计
已经有5人回复
- 关于pcr引物设计的问题
已经有6人回复
- 有关引物设计时加酶切位点
已经有8人回复
- NcoⅠ酶切位点的设计问题
已经有5人回复
- primer 5 设计引物的问题
已经有16人回复
- 关于PCR引物设计及添加酶切位点和保护碱基的问题
已经有4人回复
- 引物设计的问题
已经有6人回复
- 关于设计ＧＦＰ的引物设计问题。专家请入内
已经有3人回复
- 设计引物时酶切位点保护碱基的问题
已经有8人回复
- 【求助/交流】设计引物引入酶切位点，如何保证没有发生阅读框移码？
已经有10人回复
yujiaping1
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 3
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1365.2
- 散金: 10
- 红花: 5
- 帖子: 1174
- 在线: 66.6小时
- 虫号: 929883
- 注册: 2009-12-17
- 性别: MM
- 专业: 疫苗学
10楼2010-09-14 10:41:22
figo.339
木虫 (著名写手)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 13910.3
- 散金: 400
- 帖子: 1686
- 在线: 163.7小时
- 虫号: 467945
- 注册: 2007-11-27
- 性别: GG
- 专业: 微生物资源与分类学
2楼2010-09-13 21:49:13
yujiaping1
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 3
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1365.2
- 散金: 10
- 红花: 5
- 帖子: 1174
- 在线: 66.6小时
- 虫号: 929883
- 注册: 2009-12-17
- 性别: MM
- 专业: 疫苗学
3楼2010-09-13 21:51:36
yujiaping1
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 3
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1365.2
- 散金: 10
- 红花: 5
- 帖子: 1174
- 在线: 66.6小时
- 虫号: 929883
- 注册: 2009-12-17
- 性别: MM
- 专业: 疫苗学
4楼2010-09-13 21:52:10
figo.339
木虫 (著名写手)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 13910.3
- 散金: 400
- 帖子: 1686
- 在线: 163.7小时
- 虫号: 467945
- 注册: 2007-11-27
- 性别: GG
- 专业: 微生物资源与分类学
5楼2010-09-13 21:53:22
figo.339
木虫 (著名写手)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 13910.3
- 散金: 400
- 帖子: 1686
- 在线: 163.7小时
- 虫号: 467945
- 注册: 2007-11-27
- 性别: GG
- 专业: 微生物资源与分类学
6楼2010-09-13 21:53:42
figo.339
木虫 (著名写手)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 13910.3
- 散金: 400
- 帖子: 1686
- 在线: 163.7小时
- 虫号: 467945
- 注册: 2007-11-27
- 性别: GG
- 专业: 微生物资源与分类学
7楼2010-09-13 21:54:32
yujiaping1
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 3
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1365.2
- 散金: 10
- 红花: 5
- 帖子: 1174
- 在线: 66.6小时
- 虫号: 929883
- 注册: 2009-12-17
- 性别: MM
- 专业: 疫苗学
8楼2010-09-13 22:01:34
susizheng
木虫 (著名写手)
我們是糖 甜到憂傷
- MolEPI: 10
- 应助: 130 (高中生)
- 贵宾: 0.008
- 金币: 4706.8
- 散金: 2273
- 红花: 56
- 帖子: 2319
- 在线: 742.9小时
- 虫号: 642666
- 注册: 2008-11-01
- 性别: GG
- 专业: 有机合成
9楼2010-09-13 22:47:21
10