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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 【求助】我走高效液相色谱的基线为什么会这样？（这次图可以看到了）
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xukun1176

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助】我走高效液相色谱的基线为什么会这样？（这次图可以看到了） 已有13人参与

我用HPLC来分离多肽，用的柱子是C18
第一张图的流动相是：
   A：H20（含0.1%TFA）   B：乙腈（不含TFA）
第二和三张图的流动相是：
   A：H20（含0.1%TFA）   B：乙腈（含0.1%TFA）

洗脱条件均为：
                   A（%）             B（%）
0min                 95                   5
10min               95                   5
60min               0                   100
70min               0                   100
流速为1ml/min；

其中：第一张图与第二、三张图是分别在不同的地方走了，用的柱子也不同。
第三张图走的是制备型的C18，但是柱子材料和第二张图的完全一样。

那请问大家，为什么当我的目标峰出现后，基线总是会飘移呢？而且还是B中未加TFA的向下飘，加了TFA的向上漂，什么原因呢？那要怎么做才能抑制基线漂移呢？

另外，为什么走制备型的C18，我的目标峰会变成波浪状的山包呢？
谢谢！！！

图（1）乙腈中未加TFA

图（2）乙腈中加了TFA

图（3）制备型C18，流动相条件和柱子填料与（2）图相同，乙腈中加了TFA
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1楼 2010-09-11 14:52:33
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ajshen

木虫 (小有名气)
★ ★
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opq691(金币+1):谢谢参与，欢迎常来分析版 2010-09-14 23:22:58
TFA的最大紫外吸收是小于200的，应该不会有过大的影响吧！
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JESSICA
9楼2010-09-13 11:26:10
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happy169

木虫 (著名写手)

冰王子蜜
★ ★ ★ ★
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opq691(金币+3, ACI+1):很详细，呵呵，辛苦了，长期应助解答，奖励ACI ^-^ 2010-09-14 23:21:20
首先，我认为用梯度洗脱，基线飘逸还是正常的，看你的图猜测你用的是安捷伦仪器（手动积分有标识），为什么出了目标峰才漂移，这个想不明白，考虑会不会是巧合！
第二个问题，向上飘还是向下飘取决于在进样瞬间仪器所采集的基线信号强度决定，我认为当10分钟开始之前，基线采集的是95:5强度，0.1%TFA，前者一直是0.1%TFA,的混合，混合后TFA浓度应该低于0.1%（无TFA乙腈的加入），而后者是已经溶解了TFA的乙腈，TFA浓度始终维持在0.1%，TFA的紫外吸收导致上漂！
第三个问题，是不是考虑色谱柱的柱效问题，
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我为新生
2楼2010-09-11 16:16:12
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luomuwuhen

金虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
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opq691(金币+3):谢谢参与，欢迎常来分析版 2010-09-14 23:21:43
走梯度的时候基线不稳定很正常，最好是没进样之前先走一针溶剂梯度。制备柱感觉没出目标物是峰似的。图太乱了，积分也没积好。再一个就是波长选择问题，低波长下干扰会较大。还有就是峰形貌似不咋地，建议改变一下流动相

[ Last edited by luomuwuhen on 2010-9-11 at 16:36 ]
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药物合成
3楼2010-09-11 16:29:33
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xkp123

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
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opq691(金币+2):谢谢参与，欢迎常来分析版 2010-09-14 23:22:17
这个梯度设计的很不合理，0-10min走等度，可以把有机相的比例调为10%看看。
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4楼2010-09-11 16:49:46
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