[交流] 【讨论】BCA法侧蛋白质和考马斯蓝法是一种方法么，有什么区别已有6人参与

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一蓑烟雨任平生

1楼2010-09-06 22:02:35

dylee

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Immunoassay-Man

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Originally posted by 二氧化钛 at 2010-09-06 22:02:35:
BCA法侧蛋白质和考马斯蓝法测蛋白质是一种方法么，有什么区别

是有区别的，现在目前的BCA法文献中也用的较多，如Pierce(现被收购在Thermo旗下的）的BCA Kit 可以使用多次，灵敏度也不错。它有两种规格的。http://www.thermo.com.cn/Product4025.html ，可以找其各地经销商http://www.thermo.com.cn/article.aspx?id=3690 订的。前一段在查这个就顺便附上，省下你的时间。
个人做研究喜欢追根溯源，知其来龙去脉，对于诸法于一目的者当分门别类，知其所长所短，当然经典文献是必要的。我觉得对于测蛋白的基本方法都应有所涉猎的。以下是我花了银子文献传递的两篇文献，都很全面。两篇区别不太大。Stoscheck, C. (1990). "Quantitation of Protein." Methods in Enzymology 182: 50-69
Noble, J. E. and M. J. A. Bailey (2009). Chapter 8 Quantitation of Protein. Methods in Enzymology. R. B. Richard and P. D. Murray, Academic Press. Volume 463: 73-95.

米人链接：http://d.namipan.com/d/633ea510a ... 11622f07e9bab000f00
http://d.namipan.com/d/25acc5d44 ... 297daa53bcd66d70400

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Contents
1. Introduction 74
2. General Instructions for Reagent Preparation 75
3. Ultraviolet Absorption Spectroscopy 80
3.1. Ultraviolet absorbance at 280 nm (Range: 20–3000 mg) 80
3.2. Method 81
3.3. Comments 81
3.4. Ultraviolet absorbance at 205 nm (Range: 1–100 mg) 82
3.5. Calculation of the extinction coefficient 82
4. Dye-Based Protein Assays 83
4.1. Protein concentration standards 83
5. Coomassie Blue (Bradford) Protein Assay (Range: 1–50 mg) 85
5.1. Reagents 85
5.2. Procedure 85
5.3. Comments 86
6. Lowry (Alkaline Copper Reduction Assays) (Range: 5–100 mg) 86
6.1. Reagents 87
6.2. Procedure 87
6.3. Comments 88
7. Bicinchoninic Acid (BCA) (Range: 0.2–50 mg) 88
7.1. Reagents 88
7.2. Procedure 89
7.3. Comments 89
8. Amine Derivatization (Range: 0.05–25 mg) 89
8.1. Reagents 90
8.2. Procedure 90
8.3. Comments 90
9. Detergent-Based Fluorescent Detection (Range: 0.02–2 mg) 91

呃我没说我是好人吧

7楼2010-09-12 11:04:02

查看全部 9 个回答

dj04164

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不是同一种方法，使用的试剂都不一样，原理自然也不同。详情可以查询相关的kit说明书。thermo，生工等试剂公司都有卖的，自己查查看。

[ Last edited by dj04164 on 2010-9-6 at 23:29 ]

2楼2010-09-06 23:28:11

猫猫团

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Originally posted by dj04164 at 2010-09-06 23:28:11:
不是同一种方法，使用的试剂都不一样，原理自然也不同。详情可以查询相关的kit说明书。thermo，生工等试剂公司都有卖的，自己查查看。

[ Last edited by dj04164 on 2010-9-6 at 23:29 ]

当然不一样啦，试剂不一样。
考马斯亮蓝与蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。
而BCA试剂是由试剂A、B、C、按25：24：1配制而成的，在570nm下测吸光度。

3楼2010-09-07 15:27:30

dj04164

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引用回帖:

Originally posted by 猫猫团 at 2010-09-07 15:27:30:

当然不一样啦，试剂不一样。
考马斯亮蓝与蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。
而BCA试剂是由试剂A、B、C、按25：24：1配制而成的，在570nm下测吸光度。

呵呵，这个小妹妹呀，ABC是通用于各种试剂盒中试剂的代号。
帮楼主找了份说明，自己看看吧
http://uchome2.hbtv.com.cn/space ... do=blog&id=8900

4楼2010-09-07 15:50:27