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yyayq

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】醛基修饰的氨基载体 (戊二醛交联) 固定化脂肪酶 没有活性(失活)

虫友们好,麻烦大家给我分析下原因吧

我的实验操作是

纳米四氧化三铁     包覆   二氧化硅                   得 Fe3O4/SiO2 洗涤  干燥;
APTES 修饰Fe3O4/SiO2  得 氨基纳米载体             Fe3O4/SiO2-NH2   洗涤干燥;
氨基纳米载体Fe3O4/SiO2-NH2   用10%戊二醛  修饰得
                                                   Fe3O4/SiO2-CHO  双蒸水洗涤干净(未干燥)
直接向1g  Fe3O4/SiO2-CHO  中加酶溶液  固定化1h
离心分离   PBS洗涤   回收上清
                                分离固定化酶

实验结果:上清含蛋白40%
                  固定化酶固定化上60%
当测酶活时,固定化酶与上清都几乎没有活性

反复做,结果都是这样,请大家帮忙给分析下原因
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wangling0408

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
想请教一下戊二醛怎么加上去的啊?
7楼2012-12-11 16:41:59
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查看全部 13 个回答

geminiww

木虫 (职业作家)

猪家族~~哑巴猪

yyayq(金币+5): 2010-09-04 11:39:39
1原酶溶液的酶活有多少?
2 减少戊二醛的用量试试,戊二醛对酶活影响挺大的,游离的戊二醛没洗干净可能会使酶液中游离酶也失活吧。
爱生活。。
2楼2010-09-04 09:28:48
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yyayq

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by geminiww at 2010-09-04 09:28:48:
1原酶溶液的酶活有多少?
2 减少戊二醛的用量试试,戊二醛对酶活影响挺大的,游离的戊二醛没洗干净可能会使酶液中游离酶也失活吧。

原酶液的活力很高,基本没有损失。

同样条件下,我用吸附法,得到的IE有活性,上清也有活性

感觉没有道理啊
3楼2010-09-04 11:41:30
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geminiww

木虫 (职业作家)

猪家族~~哑巴猪


scelab(金币+1):热心虫友,欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-09-05 23:38:52
那还是戊二醛这块有问题吧,做一个戊二醛浓度梯度的,看看结果怎么样
爱生活。。
4楼2010-09-05 20:47:25
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