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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 【求助/交流】醛基修饰的氨基载体 （戊二醛交联） 固定化脂肪酶 没有活性（失活）
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yyayq

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】醛基修饰的氨基载体 （戊二醛交联） 固定化脂肪酶 没有活性（失活）

虫友们好，麻烦大家给我分析下原因吧

我的实验操作是

纳米四氧化三铁     包覆   二氧化硅                   得 Fe3O4/SiO2 洗涤  干燥；
APTES 修饰Fe3O4/SiO2  得 氨基纳米载体             Fe3O4/SiO2-NH2   洗涤干燥；
氨基纳米载体Fe3O4/SiO2-NH2   用10%戊二醛  修饰得
                                                   Fe3O4/SiO2-CHO  双蒸水洗涤干净（未干燥）
直接向1g  Fe3O4/SiO2-CHO  中加酶溶液  固定化1h
离心分离   PBS洗涤   回收上清
                                分离固定化酶

实验结果：上清含蛋白40%
                  固定化酶固定化上60%
当测酶活时，固定化酶与上清都几乎没有活性

反复做，结果都是这样，请大家帮忙给分析下原因
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1楼 2010-09-03 09:14:05
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yyayq

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by geminiww at 2010-09-04 09:28:48:
1原酶溶液的酶活有多少？
2 减少戊二醛的用量试试，戊二醛对酶活影响挺大的，游离的戊二醛没洗干净可能会使酶液中游离酶也失活吧。

原酶液的活力很高，基本没有损失。

同样条件下，我用吸附法，得到的IE有活性，上清也有活性

感觉没有道理啊
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3楼2010-09-04 11:41:30
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geminiww

木虫 (职业作家)

猪家族~~哑巴猪
yyayq(金币+5): 2010-09-04 11:39:39
1原酶溶液的酶活有多少？
2 减少戊二醛的用量试试，戊二醛对酶活影响挺大的，游离的戊二醛没洗干净可能会使酶液中游离酶也失活吧。
赞一下 回复此楼
爱生活。。
2楼2010-09-04 09:28:48
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geminiww

木虫 (职业作家)

猪家族~~哑巴猪
★
scelab(金币+1):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-09-05 23:38:52
那还是戊二醛这块有问题吧，做一个戊二醛浓度梯度的，看看结果怎么样
赞一下(1人) 回复此楼
爱生活。。
4楼2010-09-05 20:47:25
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二月客

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
我用戊二醛50%也还有活性，但是活性较低。。不过固定化载体不一样。。
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5楼2011-07-26 13:08:38
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