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C-JingX

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】氨基酸突变 已有1人参与

我做一个基因的PCR后测序,发现有3个氨基酸突变了,想问一下如何查看该氨基酸突变是否是关键性位点突变啊比如Arg变为Cys,Thr变为Ala,Pro变为Ala,帮忙分析一下,谢谢
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月月大可

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
也可以再选几个克隆送去测序,或者重新pcr然后再测序。如果你信任的模板的话!
5楼2010-09-02 14:42:24
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violet.zhou

木虫 (小有名气)

C-JingX(金币+2): 2010-09-02 11:19:41
看你基因表达后的蛋白是什么样的啊
还有看突变的是在什么位置,比如是不是在信号肽什么的
2楼2010-09-02 10:40:57
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月月大可

木虫 (著名写手)

C-JingX(金币+2):谢谢,模板序列应该是没有问题的,而且我也是用的高保真酶,不知该怎么办?老师,可以加你吗 2010-09-02 14:37:23
不建议单纯的、以为信任NCBI上的氨基酸序列,提的序列本身都是通过翻转测序获得的,这个序列有些人是经过多次验证,有些人很随意就提交了。再说你的基因来源的物种也不一定和提交序列的物种完全相同,存在个别氨基酸差异算是正常现象。

如果你的模板序列是自己实验室经过多次验证获得的,可靠性比较高,那就很有可能是你做的过程中突变引起的,使用高保真酶。
3楼2010-09-02 12:20:22
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)

C-JingX(金币+1):你好,我是研一新生,关于关键位点这词是老板说的,好像是有些位点突变后对该蛋白的功能等会引起较大变化的意思吧 2010-09-02 14:41:01
不知道你指的关键位点是特指什么地方。如果这个蛋白由人曾经研究过相关蛋白功能的,那么可以比对他的蛋白,看突变点是否在他说的范围之内。如果没有那你就只能自己做突变,分别对突变后的蛋白和未突变的蛋白比较研究功能,看是否对实际功能有影响。
52187644
4楼2010-09-02 12:27:31
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