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zhshch2009

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】为何我的蛋白纯化出来后有三条带?

请问各位做过蛋白纯化的同仁:我纯化的蛋白为何洗脱出来的是三条带?应该是100KD左右的一条才对,这是什么原因?难道是被打断了?另外这三条带都比100KD小~而加起来的总和又不100KD大

[ Last edited by zhshch2009 on 2010-9-2 at 10:21 ]
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

★ ★ ★ ★ ★
scelab(金币+5):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-09-02 22:59:25
是否加标签未知,质粒构建情况未知,纯化前有无活性检测未知,纯化前有无预处理未知,纯化方式未知,纯化步骤未知,纯化后有无活性检测未知,生物学实验严重的时候只要一个试剂或步骤出错就全盘皆输了,现在却是狗咬乌龟无从下口,这样的帖子就别浪费脑力了,走罢。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
14楼2010-09-02 17:55:13
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

★ ★ ★ ★
lstt09nk(金币+1):鼓励交流~ 2010-09-03 15:23:16
silicare(金币+3):热心~ 2010-09-06 12:24:39
his-tag是否GE的柱子本质一样,AKTA只是个仪器,不能决定纯化效果,还会有杂带正常,运气好的才有可能一次就得到单条带,一步纯化即使是亲和层析也难说的。

我现在的这个酶在粗蛋白里含量太少,在活性胶里有活性但看不到明显的蛋白质条带,不知道楼主有没有可能是这个情况。

看起来楼主根本不打算把事情说清楚,没有提供足够细节,看起来应该是问题已经解决了。睡觉去。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
21楼2010-09-03 14:40:54
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