| 查看: 1828 | 回复: 10 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
xinyaolu木虫 (小有名气)
|
[交流]
【求助/交流】连接总是连不上，如何解决 已有10人参与
|
||
本人最近在将一段2500bp的片段连到8100bp的质粒上。片段先连到克隆载体上，但一直无法连到8100bp的质粒上。期间尝试了不同的摩尔比例，连接液使用Takare的solution I，16℃连接过夜，也尝试了电转，但很多情况下连假阳性都没有。已经做了3周了，还请高手们出招指教。非常感谢！ |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有97人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
阳光金鱼唐
金虫 (著名写手)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 1177.2
- 散金: 1048
- 红花: 6
- 帖子: 1022
- 在线: 179.8小时
- 虫号: 959172
- 注册: 2010-03-01
- 性别: MM
- 专业: 计算机软件
11楼2010-09-06 20:23:06
怎么都行
银虫 (小有名气)
- 应助: 21 (小学生)
- 金币: 591.8
- 散金: 45
- 帖子: 229
- 在线: 38.2小时
- 虫号: 1050090
- 注册: 2010-06-30
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+3):够细致 2010-08-28 13:06:28
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+3):够细致 2010-08-28 13:06:28
|
LZ是把片段先连接到克隆载体上然后再切下来连到目的质粒上么？可能原因有下： 1 酶切回收的片段是你的目的片段么？ 2 你的质粒和你的片段是用同样的内切酶切的么？（保证他们有相同的粘末端） 3 如果是单酶切，那你的质粒最好在连接片段前做去磷酸化处理，防止它在连接反应中自身环化。 4 尝试换一下连接体系，比如改用NEB的T4连接体系。 5 你的质粒不适宜在该种感受态细胞中扩增。 我能想到的原因就这些，实在不行，你要把整个过程重新来过，或许在构建的前期阶段某个失误导致后来的实验失败。 |
2楼2010-08-28 12:01:24
j2
木虫 (正式写手)
- 应助: 56 (初中生)
- 金币: 3797.8
- 散金: 2
- 红花: 4
- 帖子: 688
- 在线: 108.8小时
- 虫号: 452275
- 注册: 2007-11-05
- 性别: MM
- 专业: 卫生检验
3楼2010-08-28 12:58:44
4楼2010-08-28 15:34:21