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qzhaiyan

木虫 (著名写手)

小胖子

[交流] 【求助/交流】过FPLC分子筛问题

今天过了FPLC分子筛,我的蛋白分子量24KD,本来应该在10-12ml左右出峰,结果蛋白没有分开,一直到21ml处还在出峰,如图   
开始以为是蛋白降解了,然后取了20ml处出峰的样品跑了个SDS-PAGE胶,结果条带显示是我要的蛋白。
我的蛋白怎么会拖到这么后面还在出峰,这是怎么回事啊?
大家支支招啊!谢谢了!!
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你是他姐

木虫 (小有名气)


qzhaiyan(金币+1): 谢谢参与
你需要跑块非变性胶具体确认蛋白是不是多聚,这种情况我也经常遇到。一般情况下先根据柱子marker大致确认你多聚蛋白大概在多大位置,其次跑非变性胶确认,最后通过加入DTT孵育看是不是二硫键引起的多聚,如果DTT能将二硫键打开,那后面就可以纯到单体啦~
5楼2017-06-11 00:52:29
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sqhnsd

金虫 (正式写手)


qzhaiyan(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by qzhaiyan at 2010-08-26 15:28:29:
今天过了FPLC分子筛,我的蛋白分子量24KD,本来应该在10-12ml左右出峰,结果蛋白没有分开,一直到21ml处还在出峰,如图   
开始以为是蛋白降 ...

你怎么知道它的出峰时间的?柱子动过吗?
2楼2010-08-27 12:05:04
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gdxinlan

禁虫 (正式写手)

★ ★
qzhaiyan(金币+1):谢谢参与
silicare(金币+1):谢谢参与 2010-08-27 21:53:12
本帖内容被屏蔽

3楼2010-08-27 14:26:49
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taishanwei

铁虫 (初入文坛)

蛋白多聚吧


qzhaiyan(金币+1):谢谢参与
蛋白多聚吧
本文来自: 小木虫论坛 http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2335777
4楼2010-09-02 22:54:10
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