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【求助/交流】蛋白纯化后透析及浓缩问题
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虫友们，大家好！请教大家一个问题，不胜感激。 蛋白纯化时洗脱缓冲液为300 mM NaCl; 350 mM imidazole,50 mM sodium phosphate buffer, pH 8.0。因为后续实验要肠激酶切割，所以用肠激酶缓冲液来透析，但是透析过夜后沉淀。原因可能是透析缓冲液的pH值（7.4）与目的蛋白等电点(7.2)相差太近。 然后用Amicon超滤离心管来除盐、浓缩，效果不好，可能也有操作不熟练问题，基本没有浓缩效果。 所以还是想通过透析，冻干的方法来达到除盐、浓缩的目的，但是用肠激酶缓冲液的话又会沉淀，而且冻干后对溶液也有一个浓缩的效果。 现在我有两种想法： 一、将肠激酶缓冲液的pH值调到8.5，透析过夜，问题是冻干后会将蛋白所在缓冲液一起冻干浓缩； 二、将超纯水的pH值调到8.5，透析过夜。 不知虫友们有没有更好的解决方法，请虫友们不吝赐教，多谢大家！ |
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风影一生
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9楼2013-08-20 09:14:13