24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

军歌

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 285.5
帖子: 17
在线: 7.2小时
虫号: 404693
注册: 2007-06-17
性别: GG
专业: 生命科学

[交流] 【求助/交流】大肠杆菌感受态制备及转化中的问题已有3人参与

请求各位帮帮忙，本人制作完DH5α感受态以后，做转化，过夜，第二天菌斑长的还可以，但是有大有小，做PCR鉴定，结果什么都没有，我一共做了20个样品，全都是这样，我怀疑是杂菌，但是，如果质粒没有转进去，杂菌在含有抗生素（amp）的平板上是不会长的呀。会不会是载体自连？
另外，是不是涂完板后，只要长出菌斑，感受态就应该没有问题，我现在也不知道到底是我连接的有问题，还是我的感受态有问题
多谢各位能给与帮助
谢谢

回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

1楼 2010-08-25 09:52:00

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

oyanxuelai

银虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 372.8
红花: 1
帖子: 141
在线: 103.4小时
虫号: 982664
注册: 2010-03-26
性别: GG
专业: 微生物生理与生物化学

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

哈哈,你可以设计两组对照,一组阳性对照,用标准的质粒进行转化;一组阴性对照,不加任何DNA.一般情况下,阳性对照菌落长得很多,阴性对照不长菌.如果阴性对照长了,说明感受态受污染,有杂菌存在.

赞一下(1人)

回复此楼

3楼2010-08-25 13:19:57

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

查看全部 4 个回答

silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

MolEPI: 1
应助: 88 (初中生)
贵宾: 29.823
金币: 18946.3
散金: 24272
红花: 300
沙发: 88
帖子: 10222
在线: 1602.6小时
虫号: 948825
注册: 2010-01-26
专业: 摩尼教
管辖: 新药研发

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

呵呵，好多杂菌都是基因组自带抗性的

有可能是你的感受态里边有杂菌，或者你的操作有点问题

amp会出一个微星菌落的问题，所以应该挑大斑

另外，如果抗生素效价低的话也肯能，但抗生素失效往往都是成片的没有单克隆，出单克隆的概率很低

所以基本可以断定是污染了杂菌

关于感受态，有菌只能说明他们没有死，不能反应效率，这个需要转化一个环形质粒做阳性对照

同时你也应该用未转化的感受态去做一个阴性对照，这样判断是不是感受态污染，是不是操作问题，是不是抗生素问题

所以你的问题做两个对照就解决了

赞一下(1人)

回复此楼

2楼2010-08-25 10:22:15

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖