| 查看: 1933 | 回复: 8 | ||||
wending7000金虫 (初入文坛)
|
[交流]
【分享】RNA实验操作注意事项 已有8人参与
|
|
在所有RNA实验中，最关键的因素是分离得到全长的RNA。而实验失败的主要原因是核糖核酸酶（RNA酶）的污染。由于RNA酶广泛存在而稳定，一般反应不需要辅助因子。因而RNA制剂中只要存在少量的RNA酶就会引起RNA在制备与分析过程中的降解，而所制备的 RNA的纯度和完整性又可直接影响RNA分析的结果，所以RNA的制备与分析操作难度极大。 在实验中，一方面要严格控制外源性RNA酶的污染；另一方面要最大限度地抑制内源性的RNA酶。RNA酶可耐受多种处理而不被灭活，如煮沸、高压灭菌等。 外源性的RNA酶存在于操作人员的手汗、唾液等，也可存在于灰尘中。在其它分子生物学实验中使用的RNA酶也会造成污染。这些外源性的RNA酶可污染器械、玻璃制品、塑料制品、电泳槽、研究人员的手及各种试剂。而各种组织和细胞中则含有大量内源性的RNA酶。 一、 防止RNA酶污染的措施 1. 所有的玻璃器皿均应在使用前于180℃的高温下干烤6h或更长时间。 2. 塑料器皿可用0.1%DEPC水浸泡或用氯仿冲洗（注意：有机玻璃器具因可被氯仿腐蚀，故不能使用）。 3. 有机玻璃的电泳槽等，可先用去污剂洗涤，双蒸水冲洗，乙醇干燥，再浸泡在3% H2O2 室温10min，然后用0.1% DEPC水冲洗，晾干。 4. 配制的溶液应尽可能的用0.1% DEPC，在37℃处理12h以上。然后用高压灭菌除去残留的DEPC。不能高压灭菌的试剂，应当用DEPC处理过的无菌双蒸水配制，然后经0.22μm滤膜过滤除菌。 5. 操作人员戴一次性口罩、帽子、手套，实验过程中手套要勤换。 6. 设置RNA操作专用实验室，所有器械等应为专用。 二、常用的RNA酶抑制剂 1. 焦磷酸二乙酯（DEPC）：是一种强烈但不彻底的RNA酶抑制剂。它通过和RNA酶的活性基团组氨酸的咪唑环结合使蛋白质变性，从而抑制酶的活性。 2. 异硫氰酸胍：目前被认为是最有效的RNA酶抑制剂，它在裂解组织的同时也使RNA酶失活。它既可破坏细胞结构使核酸从核蛋白中解离出来，又对RNA酶有强烈的变性作用。 3. 氧钒核糖核苷复合物：由氧化钒离子和核苷形成的复合物，它和RNA酶结合形成过渡态类物质，几乎能完全抑制RNA酶的活性。 4. RNA酶的蛋白抑制剂（RNasin）：从大鼠肝或人胎盘中提取得来的酸性糖蛋白。RNasin是RNA酶的一种非竞争性抑制剂，可以和多种RNA酶结合，使其失活。 5. 其它：SDS、尿素、硅藻土等对RNA酶也有一定抑制作用。 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 核酸生物学实验经验 |
» 猜你喜欢
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有254人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
化工申博
已经有3人回复
-
申博自荐
已经有2人回复
-
广西民族大学化学化工学院化学工程与技术学硕，材料化工专硕调剂名额充足！
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- RNA 提取的一些问题，请大家帮忙回答
已经有13人回复
- 推荐一本很实用的入门教材：分子生物学与基因工程实验教程
已经有27人回复
- 【资料】RNA提取实验操作步骤、注意事项及问题指南--综合总结
已经有483人回复
- 【求助/交流】trizol 提ＲＮＡ中的一些问题
已经有24人回复
- 【求助/交流】荧光原位杂交实验技术
已经有13人回复
- 【求助/交流】从RNA到cDNA合成再到克隆PCR的实验技巧和操作细节问题若干，寻求解答
已经有12人回复
- 避免RNA酶污染的方法
已经有10人回复
xp198766
铁杆木虫 (著名写手)
小木虫职业打酱油滴~~！
- MolEPI: 1
- 应助: 5 (幼儿园)
- 金币: 6525.1
- 散金: 262
- 红花: 25
- 帖子: 2193
- 在线: 554小时
- 虫号: 1046859
- 注册: 2010-06-24
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
2楼2010-08-19 22:04:28
chachaxionga
新虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 729.3
- 散金: 90
- 帖子: 308
- 在线: 194小时
- 虫号: 1018929
- 注册: 2010-05-15
- 性别: MM
- 专业: 兽医寄生虫学
3楼2010-08-23 11:22:28
echocool
木虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1719.2
- 散金: 10
- 帖子: 650
- 在线: 201.6小时
- 虫号: 602826
- 注册: 2008-09-15
- 专业: 植物病理学
4楼2010-08-23 11:24:42
swallow52u
银虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 415.5
- 散金: 42
- 红花: 5
- 帖子: 355
- 在线: 138.4小时
- 虫号: 477054
- 注册: 2007-12-13
- 性别: MM
- 专业: 临床药理
5楼2011-03-25 22:48:39
6楼2011-03-26 16:30:57
7楼2011-03-27 10:32:24
wlyanddmj
铜虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1395.5
- 散金: 34
- 红花: 1
- 帖子: 392
- 在线: 32.9小时
- 虫号: 1678838
- 注册: 2012-03-09
- 性别: MM
- 专业: 化学生物学与生物有机化学
8楼2012-05-21 11:43:05
jinhx87
至尊木虫 (知名作家)
- 应助: 48 (小学生)
- 金币: 28184.7
- 红花: 6
- 帖子: 6691
- 在线: 1213.2小时
- 虫号: 81315
- 注册: 2005-07-19
- 专业: 微生物遗传育种学
9楼2012-05-21 13:25:48
