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chinaluhy银虫 (正式写手)
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[交流]
【求助/交流】western blot中的怪现象，求解~~~ 已有4人参与
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事情是这样的，我是新手，学习做western blot有一个多月的时间。出现了一件怪事情，我们胶上的蛋白怎么也转不到膜上~~~实验室这么多年从来没有出现过的怪事~郁闷啊！ 具体情况如下： 我们使用的是5%的浓缩胶，12的分离胶，湿法转膜。 15号上午我配了三块胶，16号上午另外一个同学配了一块胶，16号下午上样，16号晚上转膜过夜，恒流200mA，使用NC膜。17号上午拆掉转膜装置，丽春红预染时发现marker还在胶上，膜上几乎什么都没有。重新配置转膜液，17号晚上恒压30V转膜过夜，18号上午还是没有转上去。18号换了转膜液中的试剂，Tris，甘氨酸，甲醇，200mA转膜2小时，下午发现还是没有转上~~~我们又重新配制了两块胶，上样电泳后，将一块新胶和一块旧胶放在同一个转膜的盒子里，今天起来，新胶转上了，旧胶还是没转上~~~用考马斯亮蓝染旧胶，发现蛋白泳道都在胶上。 现在实验室的人都没有办法解释这个现象，希望有经验的人可以来指明方向。谢谢！ 忘说了，实验还有师兄师姐在做，结果都很好。老师还让我们试了一下pvdf膜，还是转不上去。谢谢大家踊跃解答疑问~ [ Last edited by chinaluhy on 2010-8-19 at 18:31 ] |
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