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【求助/交流】从蛋白胶里回收蛋白 已有7人参与
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如题，该如何操作呢，请有经验的战友们介绍下 3Q~ |
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段家一凡
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-08-18 06:17:21
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-08-18 06:17:21
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蛋白本来就带有电荷，如天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸等都带有电荷， 你添加SDS只是使所有蛋白质都带上了负电，屏蔽了自身所带的电荷，所以电泳的远近只和蛋白质的分子量有关系了。非变性胶就是利用蛋白本身所带的电荷进行电泳的，跑出来的效果没有SDS-PAGE的好，有时可能有一点拖带，但这是很常用的一种方法。比如双向电泳的第一项就是等点聚焦，利用的就是不同蛋白质的所带电荷来分离的。我们跑的native-page也加染料，就是把SDS去掉的染料就可以了。除非你有什么特殊的目的，确实什么都不用添加的。 关于蛋白的回收用该方法也可以，你可以只染一个泳道的就行了，其他的你就按照染色的泳道对回来就可以了，切下胶条后如楼上所述，把胶条尽量切碎，加入缓冲液，4度过夜，然后离心取上清，浓缩可以用超滤管（10kD或30Kd的截留量）就可以了，回收率可能不高。 |
14楼2010-08-18 00:45:42
cpn
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2楼2010-08-17 14:53:30
3楼2010-08-17 15:44:55
sqhnsd
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4楼2010-08-17 15:52:55