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pxf983621

铁杆木虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-08-12 06:04:17
PCR是体外酶促合成特异DNA片段的方法,主要由高温变性、低温退火和适温延伸三个步骤反复的热循环构成: 即在高温(95℃)下,待扩增的靶DNA双链受热变性成为两条单链DNA模板;而后在低温(37~55℃)情况下,两条人工合成的寡核苷酸引物与互补的单链DNA模板结合,形成部分双链;在Taq酶的最适温度(72℃)下,以引物3’端为合成的起点,以单核苷酸为原料,沿模板以5’→3’方向延伸,合成DNA新链。这样,每一双链的DNA模板,经过一次解链、退火、延伸三个步骤的热循环后就成了两条双链DNA分子。如此反复进行,每一次循环所产生的DNA均能成为下一次循环的模板,每一次循环都使两条人工合成的引物间的DNA特异区拷贝数扩增一倍,PCR产物得以2n的批数形式迅速扩增,经过25~30个循环后,理论上可使基因扩增109倍以上,实际上一般可达106~107倍。
11楼2010-08-11 20:32:28
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cxfans

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
现在的PCR仪功能很全,设定好程序一切都自动完城了
12楼2010-08-14 17:27:27
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jolly_2006


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
高温变性,退火,延伸
13楼2010-08-14 20:01:15
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yuanzi0501

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我也是新手,感觉自己查资料学习要好点,记忆比较深。
14楼2010-08-15 19:08:59
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liuliuchang

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
聚合酶链式反应简称PCR(英文全称:Polymerase Chain Reaction)
alwayskeepthefaith
15楼2010-12-30 19:22:44
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tryingtimes

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by jndxmmc at 2010-08-11 11:14:01:
你可以看一些关于微生物实验的动画 很形象 我有几个 不知道怎么上穿

真的啊?麻烦能给我发一份吗?trying-4120@sohu.com 这是我的邮箱,谢谢!
没完没了
16楼2010-12-31 00:04:19
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hello466725

金虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by guoxi_7_7 at 2010-08-09 07:39:58:
谁能讲下PCR的技巧啊?谢谢!!

基本没有什么技巧。全靠参考文献条件,然后自己摸索。加油
多看文献。。。
淡定
17楼2010-12-31 11:05:08
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zuixianzi

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
上传一本PCR克隆指南与大家交流
希望能和做植物抗冻以及转录因子的战友多交流
18楼2010-12-31 14:33:02
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181587941

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
高温变性:让模板解链
退火:让引物结合到模板上
延伸:核苷酸结合到引物后面,形成新链

原料一次性加到位,通过温度变化循环来控制复制,循环一次,DNA增倍。两次就四倍。以此类推。

技巧方面嘛,就是引物及模板加多少的问题,对于不同的模板不同浓度的引物,慢慢总结经验吧,引物过多,会形成引物二聚体;太少,效果不好。
19楼2011-01-03 13:17:50
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胖了一圈

木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
16楼: Originally posted by tryingtimes at 2010-12-31 00:04:19
真的啊?麻烦能给我发一份吗?trying-4120@sohu.com 这是我的邮箱,谢谢!...

可以发我一份吗?谢谢先了!229151605@qq.com  非常感谢!
终于申请到账号了……
20楼2014-09-23 22:06:54
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