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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR 的原理是啥啊
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pxf983621

铁杆木虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-08-12 06:04:17
PCR是体外酶促合成特异DNA片段的方法，主要由高温变性、低温退火和适温延伸三个步骤反复的热循环构成： 即在高温（95℃）下，待扩增的靶DNA双链受热变性成为两条单链DNA模板；而后在低温（37～55℃）情况下，两条人工合成的寡核苷酸引物与互补的单链DNA模板结合，形成部分双链；在Taq酶的最适温度（72℃）下，以引物3’端为合成的起点，以单核苷酸为原料，沿模板以5’→3’方向延伸，合成DNA新链。这样，每一双链的DNA模板，经过一次解链、退火、延伸三个步骤的热循环后就成了两条双链DNA分子。如此反复进行，每一次循环所产生的DNA均能成为下一次循环的模板，每一次循环都使两条人工合成的引物间的DNA特异区拷贝数扩增一倍，PCR产物得以2n的批数形式迅速扩增，经过25～30个循环后，理论上可使基因扩增109倍以上，实际上一般可达106～107倍。
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11楼2010-08-11 20:32:28
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cxfans

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
现在的PCR仪功能很全，设定好程序一切都自动完城了
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12楼2010-08-14 17:27:27
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jolly_2006

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
高温变性，退火，延伸
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13楼2010-08-14 20:01:15
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yuanzi0501

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我也是新手，感觉自己查资料学习要好点，记忆比较深。
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14楼2010-08-15 19:08:59
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liuliuchang

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
聚合酶链式反应简称PCR（英文全称：Polymerase Chain Reaction)
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alwayskeepthefaith
15楼2010-12-30 19:22:44
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tryingtimes

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by jndxmmc at 2010-08-11 11:14:01:
你可以看一些关于微生物实验的动画 很形象 我有几个 不知道怎么上穿

真的啊？麻烦能给我发一份吗？trying-4120@sohu.com 这是我的邮箱，谢谢！
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没完没了
16楼2010-12-31 00:04:19
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hello466725

金虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by guoxi_7_7 at 2010-08-09 07:39:58:
谁能讲下PCR的技巧啊？谢谢！！

基本没有什么技巧。全靠参考文献条件，然后自己摸索。加油
多看文献。。。
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淡定
17楼2010-12-31 11:05:08
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zuixianzi

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
上传一本PCR克隆指南与大家交流
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希望能和做植物抗冻以及转录因子的战友多交流
18楼2010-12-31 14:33:02
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181587941

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
高温变性：让模板解链
退火：让引物结合到模板上
延伸：核苷酸结合到引物后面，形成新链

原料一次性加到位，通过温度变化循环来控制复制，循环一次，DNA增倍。两次就四倍。以此类推。

技巧方面嘛，就是引物及模板加多少的问题，对于不同的模板不同浓度的引物，慢慢总结经验吧，引物过多，会形成引物二聚体；太少，效果不好。
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19楼2011-01-03 13:17:50
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胖了一圈

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
16楼: Originally posted by tryingtimes at 2010-12-31 00:04:19
真的啊？麻烦能给我发一份吗？trying-4120@sohu.com 这是我的邮箱，谢谢！...

可以发我一份吗？谢谢先了！229151605@qq.com  非常感谢！
赞一下 回复此楼
终于申请到账号了……
20楼2014-09-23 22:06:54
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