| 查看: 2048 | 回复: 7 | |||
[交流]
【求助/交流】PEG修饰度的检测问题，非常需要您的帮助已有5人参与
|
|
检测PEG修饰的蛋白的PEG修饰度，结果测出修饰后的游离氨基比修饰前的还多，会是什么原因呢？请各位高手指教一二，现在真是不知道怎么办了，重复了几次，计算出的修饰度都很小，小于10%，接近9，甚至是负值，原因在哪呢？ 方法参照： 1.lowry法测定PEG修饰前后蛋白浓度，精密稀释至1mg/ml待用。 2.两种蛋白分别量取0, 40, 80, 120, 200, 300, 400微升于试管内，补加PB缓冲液至1ml。 3.加入PH8.5的NaHCO3缓冲液1ml 4.再加入0.1%TNBS溶液1ml 5.混匀后，40度反应2小时。 6.加入10%SDS溶液1ml,加入1M HCL 0.5ml. 7.测定420nm 下的OD值，绘制曲线。 修饰度=1-修饰蛋白斜率/修饰前蛋白斜率。 对吗？ 为什么结果总是不对呢？问题会出在哪里呢？怎么检测分析啊， 非常需要您的帮助，吾将不胜感激！ |
回复此楼» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有97人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
氨基酸螯合铜问题交流
已经有10人回复- 求一高分子合成PMMA-b-PEG嵌段聚合物
已经有20人回复
- 光固化的PEG基水凝胶材料出现裂纹、变形的问题
已经有6人回复
- 请问大家用PEG修饰量子点的这种方法有没有什么缺陷呢？
已经有3人回复
- 乙氧基化非离子表面活性剂中PEG含量的检测
已经有6人回复
- 求教 PEG2000 除水 问题。。。。
已经有32人回复
- PEG修饰的问题
已经有7人回复
- 【求助】PEG和PEO问题
已经有26人回复
- 【求助】小分子量PEG沉淀问题
已经有10人回复
- 【请教】双羧基PEG如何修饰纳米粒子
已经有8人回复
2楼2010-08-03 10:40:47
chenting211
木虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1790.9
- 红花: 1
- 帖子: 42
- 在线: 53.2小时
- 虫号: 275014
- 注册: 2006-08-27
- 专业: 生物化学
3楼2010-08-03 16:44:08
|
您好，谢谢您的关注和热心帮助。 我今天又做了一遍实验，算出的修饰度还是小于零，这次小更多了，成了-50%。修饰度怎么可能是负值呢？真是让人郁闷。 首先我的方法重复性也不是很好，因为样品我用了一样的，可是测出的结果并不一致。但是我操作已经很认真了啊，怎么会差别这么多呢。 修饰后的蛋白已经过过分子筛S200，所以应该不会有残留的PEG了， 修饰前的蛋白也用了7000的透析膜进行了4次透析，还会有问题吗？ lowry法也侧过几次，蛋白浓度相差在可以接受范围内。 那么还有什么是我没考虑到的呢？这个方法还应该怎么改进才对呢？ 查文献也查不到几篇，找不到能帮助的资料，所以请各位进行过这种检测的朋友帮帮忙，谢谢您！ |
4楼2010-08-03 17:06:29
chenting211
木虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1790.9
- 红花: 1
- 帖子: 42
- 在线: 53.2小时
- 虫号: 275014
- 注册: 2006-08-27
- 专业: 生物化学
5楼2010-08-04 09:23:29
6楼2010-08-06 14:20:15
ocean1982
铜虫 (正式写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 8124.3
- 散金: 112
- 红花: 1
- 帖子: 569
- 在线: 40.1小时
- 虫号: 372241
- 注册: 2007-05-15
- 专业: 有机合成
7楼2012-06-24 16:54:05
8楼2013-03-05 22:41:48