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【求助/交流】酶解法做根尖染色体鉴定必须用Giemsa 染色液染色吗？已有2人参与
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酶解法做根尖染色体鉴定必须用Giemsa 染色液染色吗？ Giemsa 染色液比较难的配制 那我直接用改良品红来染色 可以不呢？ 染了色还需要盖盖玻片不呢? 希望好心人指点一二哦！！！ 实验步骤： 根尖染色体观察 (1)材料的准备：选择生长旺盛的植株，然后将根尖用剪刀去掉老根，放在清水中，可以适当加些肥料如尿素等，但注意不能过量，经常换水，待根尖长到1厘米时，选择生长粗壮的根尖剪下，用0.002％的8-羟基喹啉预处理2～3小时(处理时温度不要太高，最好保持在25℃以下)，再把根尖转移到Carnoy's溶液中固定1～24小时，如果能马上进行处理更好，如果不能则保存在70％的酒精中，4℃保存备用。 (2)根尖的处理：取出保存的根尖，用水充分冲洗，在37℃温度下酶解 (2.5％的纤维素酶和1.0％的果胶酶)2～2.5小时，用针尖压根尖，应有“软”的感觉，不软则染色体不易分散开，太软则染色体容易丢失，具体的时间依照根尖的生长情况而定。 (3)涂片：酶解完成后，用水充分冲洗根尖，取少量的分生区在洁净的载玻片上进行涂片(一个根尖可以做几个涂片)，注意不能太多，否则会造成细胞重叠。为了分散良好，用乙酸和甲醛按照1∶3的比例配制新鲜的混合液，取一滴滴在材料上，细胞会自然铺展开来，效果不错。之后立即用火焰干燥或者自然干燥，二者的区别不大。 (4)染色：改良品红染色。？？？ (5)观察和照相：预先在普通的光学显微镜上进行初步筛选，选取分散良好染色适度的片子在激光共聚焦显微镜上观察并照相。 |
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2楼2010-07-29 19:20:02
lixg
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3楼2010-07-30 08:00:30