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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】枯草芽孢杆菌电转化
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weishengsu5

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10楼: Originally posted by yesucao at 2011-10-24 16:55:42:
山梨醇的作用不清楚，转化后离心一下，留下大概100微升，用枪头吹打均匀后涂板，每个平板50微升

怎么样，枯草的电转化成功了吗
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11楼2012-03-07 10:59:08
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ben1147

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2435411楼: Originally posted by shuangzi8761 at 2011-10-19 11:38:18:
求教 这里的山梨醇有何作用？转化后需要稀释涂板吗

山梨醇和甘露醇都是提供渗透压的，这个方法的原始文献可以搜一下
High osmolarity improves the electro-transformation efficiency of the gram-positive bacteria Bacillus subtilis and Bacillus licheniformis
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12楼2012-04-19 22:22:03
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chxiuagoing

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2435404楼: Originally posted by yesucao at 2011-10-19 11:04:05
昨天刚做过一次，里面培养基的配置完全一样，就是培养量，培养时间，抗生素啊，温度之类的不同

我按照上面的方法做了五六次啦！！！都没成功啊！！！能告诉我什么条件需要改吗？非常感谢啊啊！！！！！！！！
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13楼2012-09-10 08:53:27
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yesucao

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2465374楼: Originally posted by chxiuagoing at 2012-09-10 08:53:27
我按照上面的方法做了五六次啦！！！都没成功啊！！！能告诉我什么条件需要改吗？非常感谢啊啊！！！！！！！！...

要是感受态、电击缓冲液之类的没什么问题，建议你把电击的条件优化一下，做个相应的梯度，还有你用的是什么型号的电击转化仪
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14楼2012-09-10 22:08:24
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chxiuagoing

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2465432楼: Originally posted by yesucao at 2012-09-10 22:08:24
要是感受态、电击缓冲液之类的没什么问题，建议你把电击的条件优化一下，做个相应的梯度，还有你用的是什么型号的电击转化仪...

电击转化仪型号不太清楚诶，，，不过最高只能达到3000v的电压。。。
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15楼2012-09-21 15:17:09
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chxiuagoing

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2466209楼: Originally posted by chxiuagoing at 2012-09-21 15:17:09
电击转化仪型号不太清楚诶，，，不过最高只能达到3000v的电压。。。...

还有 感受态怎么检测其好坏，电击缓冲液应该是没问题的。。。电击的条件做梯度是指电压吗？还是质粒浓度啊什么的？谢谢不吝赐教，，，我现在还没进去啊。。。感受态做了三批了。。。。
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16楼2012-09-21 15:29:46
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chxiuagoing

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2435405楼: Originally posted by yesucao at 2011-10-19 11:05:02
今天培养基上已经长了蛮多的单菌落，实验结果等待进一步的验证

请教枯草电转啊!!!!!!????谢谢谢谢！！！！
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17楼2012-09-21 15:37:21
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chxiuagoing

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2435406楼: Originally posted by yesucao at 2011-10-19 11:05:47
电击缓冲液的葡萄糖，我改成甘油了

这个葡萄糖跟甘油的作用是什么啊？请赐教啊！！！？？？
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18楼2012-09-21 15:41:37
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