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【求助/交流】最近我的MTT是这样做的，结果很惨 已有4人参与
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之前多次做过MTT，结果时好时坏 这次实验是用的耐药细胞株做的MTT 测四种药物对细胞的IC50 第一种：拓扑替康，药物水溶性不是很好，放置十分钟可看到沉淀，但摇动后肉眼观察是均匀的。前面曾经做过，药物的吸光值会对结果影响很大，出现药物浓度越高，吸光值越高的情况。 本次实验：细胞铺板密度5000个每孔，96孔板，24小时后给药，药物浓度设为7个。给药后24小时，我将含药培养液全部吸出，并用PBS洗涤一遍，吸掉PBS后，加入MTT，4小 时后加DMSO测吸光值。 490nm时，明显，还是随药物浓度升高OD值升高，药物浓度很大时（1mg/ml），OD值最高，3点几，4点几了。 570nm时，药物浓度越高OD值越高，但药物浓度很大时（1mg/ml），相对（0.1mg/ml）的OD值也变化不大，都在2点几，接近3。 第二种：表阿霉素，细胞铺板及处理方式均是一样的，也用PBS洗了。 在药物浓度小于（10微克/ml）时，OD值随药物浓度增加而减少，有抑制细胞生长的结果。但在药物浓度增大到100微克/ml以上时，吸光值也开始增加了。如果药物到了1mg/ml。吸光值飚升。 第三种第四种是我们新的药物，看到的结果是反而促进细胞增长。这个很难说。怪我当时没有用显微镜观察下，细胞有没有死。 很着急的，就是做不出点好结果，自己也琢磨不出来。 希望各位指点指点，不胜感激。 [ Last edited by 蜗牛VS蜗牛 on 2010-7-24 at 09:45 ] |
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1949stone(金币+3):够朋友 2010-07-24 13:20:22
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MTT的吸光度一般以不超过1或者1.2为宜，过头了就是不准的了。可以试试低一点细胞密度，如1000个细胞。另外就是加DMSO的时候加多一点，比如200ul/孔 细胞数的控制其实也要根据细胞的个头来确定的。一般药物处理24h的话，可以在种板的时候控制给药当天细胞密度大概在50%左右即可。细胞太密堆起来的话，做什么实验都不准确 如果你的药物跟MTT之间没有什么交互作用的话，不要用PBS洗了，因为96孔板很容易吸掉细胞，又引入误差。 MTT实验总之就是一个细致，包括从种细胞开始，记得将误差平均分到每个组每个复孔，比如种组1的第一个，组2的第一个，组3的第一个……组1的第二个……还有就是在种的过程中不断摇晃要接种的细胞悬液，保证均匀。96孔种下去的细胞不要摇，因为这种小孔板一摇细胞就容易堆在一起不均匀。 另外就是换液的操作枪头不要戳到板底，最后一步加DMSO前的弃上清也要特别小心，我们是用负压很小心来吸的，用枪头万一用力过猛就把一片结晶吸走了 接lz站内信，上来回复~~~~ 还是论坛交流吧 |
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