| 查看: 3689 | 回复: 8 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
【求助/交流】最近我的MTT是这样做的，结果很惨 已有4人参与
|
|||
|
之前多次做过MTT，结果时好时坏 这次实验是用的耐药细胞株做的MTT 测四种药物对细胞的IC50 第一种：拓扑替康，药物水溶性不是很好，放置十分钟可看到沉淀，但摇动后肉眼观察是均匀的。前面曾经做过，药物的吸光值会对结果影响很大，出现药物浓度越高，吸光值越高的情况。 本次实验：细胞铺板密度5000个每孔，96孔板，24小时后给药，药物浓度设为7个。给药后24小时，我将含药培养液全部吸出，并用PBS洗涤一遍，吸掉PBS后，加入MTT，4小 时后加DMSO测吸光值。 490nm时，明显，还是随药物浓度升高OD值升高，药物浓度很大时（1mg/ml），OD值最高，3点几，4点几了。 570nm时，药物浓度越高OD值越高，但药物浓度很大时（1mg/ml），相对（0.1mg/ml）的OD值也变化不大，都在2点几，接近3。 第二种：表阿霉素，细胞铺板及处理方式均是一样的，也用PBS洗了。 在药物浓度小于（10微克/ml）时，OD值随药物浓度增加而减少，有抑制细胞生长的结果。但在药物浓度增大到100微克/ml以上时，吸光值也开始增加了。如果药物到了1mg/ml。吸光值飚升。 第三种第四种是我们新的药物，看到的结果是反而促进细胞增长。这个很难说。怪我当时没有用显微镜观察下，细胞有没有死。 很着急的，就是做不出点好结果，自己也琢磨不出来。 希望各位指点指点，不胜感激。 [ Last edited by 蜗牛VS蜗牛 on 2010-7-24 at 09:45 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有73人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求助mtt实验结果无法重复的原因
已经有3人回复
- 96孔板接种细胞
已经有6人回复
- MTT实验数据处理
已经有11人回复
- 【我是这样做科研的】新文献、新想法、新观点、新结果
已经有57人回复
- MTT跟流式结果相反
已经有4人回复
- MTT实验结果怎么看？
已经有3人回复
- 【求助】为什么MTT试验只出现一次剂量依赖性结果？请教
已经有4人回复
- 【求助/交流】MTT结果分析，药物机理解释
已经有23人回复
- 【求助/交流】MTT法确定药物对细胞的作用浓度范围 结果如何分析
已经有21人回复
- 【求助】脂质体载药的MTT实验结果，为什么72h的细胞毒性低于24h,48h的毒性。
已经有6人回复
- MTT实验的空白对照值很高，结果还可信吗？
已经有19人回复
- 【求助】MTT结果分析的问题
已经有6人回复
三磷酸腺苷
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 7
- 应助: 1 (幼儿园)
- 贵宾: 0.021
- 金币: 7298.5
- 散金: 9
- 红花: 13
- 帖子: 4032
- 在线: 224.7小时
- 虫号: 551611
- 注册: 2008-04-27
- 性别: GG
- 专业: 神经系统肿瘤（含特殊感受
4楼2010-07-24 11:24:31
三磷酸腺苷
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 7
- 应助: 1 (幼儿园)
- 贵宾: 0.021
- 金币: 7298.5
- 散金: 9
- 红花: 13
- 帖子: 4032
- 在线: 224.7小时
- 虫号: 551611
- 注册: 2008-04-27
- 性别: GG
- 专业: 神经系统肿瘤（含特殊感受
★ ★ ★
蜗牛VS蜗牛(金币+5): 2010-07-24 11:21:21
1949stone(金币+3):够朋友 2010-07-24 13:20:22
蜗牛VS蜗牛(金币+5): 2010-07-24 11:21:21
1949stone(金币+3):够朋友 2010-07-24 13:20:22
|
MTT的吸光度一般以不超过1或者1.2为宜，过头了就是不准的了。可以试试低一点细胞密度，如1000个细胞。另外就是加DMSO的时候加多一点，比如200ul/孔 细胞数的控制其实也要根据细胞的个头来确定的。一般药物处理24h的话，可以在种板的时候控制给药当天细胞密度大概在50%左右即可。细胞太密堆起来的话，做什么实验都不准确 如果你的药物跟MTT之间没有什么交互作用的话，不要用PBS洗了，因为96孔板很容易吸掉细胞，又引入误差。 MTT实验总之就是一个细致，包括从种细胞开始，记得将误差平均分到每个组每个复孔，比如种组1的第一个，组2的第一个，组3的第一个……组1的第二个……还有就是在种的过程中不断摇晃要接种的细胞悬液，保证均匀。96孔种下去的细胞不要摇，因为这种小孔板一摇细胞就容易堆在一起不均匀。 另外就是换液的操作枪头不要戳到板底，最后一步加DMSO前的弃上清也要特别小心，我们是用负压很小心来吸的，用枪头万一用力过猛就把一片结晶吸走了 接lz站内信，上来回复~~~~ 还是论坛交流吧 |
2楼2010-07-24 10:06:40
3楼2010-07-24 11:20:59
windbells636
金虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1089.9
- 散金: 145
- 红花: 2
- 帖子: 169
- 在线: 50.8小时
- 虫号: 1047896
- 注册: 2010-06-26
- 性别: MM
- 专业: 细胞生长与分裂
5楼2010-09-17 16:13:04
20