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木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】引物更换酶切位点后PCR 已有2人参与

最近小弟在做一个目的基因连pET载体，原来P这个基因的引物上面的酶切位点需要更换，换了之后在进行PCR，结果出来的条带很小，更换之前的引物PCR条带很亮，现在的不怎么亮。然后在进行了前后2种不同酶切位点的引物一起PCR，结果是都没Ｐ出来，奇怪，请高手指点！谢谢！

Nevergiveup,neverslowdown;Nevergrowold,nevereverdieyoung......

1楼 2010-07-20 21:04:03

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木虫 (著名写手)

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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+3):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-07-20 23:43:22

换了之后不亮了，会不会是因为新的酶切位点使引物自身或者引物之间形成了二级结构，影响了PCR的扩增效率，可以多加一点引物试试

放在一起P不出来，或许也是因为形成复杂的二级结构的原因

2楼2010-07-20 21:53:40

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金虫 (正式写手)

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scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-07-20 23:43:38

test your template quality and dNTP, is there some primer dimers?

有勇气去改变你可以改变的,有度量去容忍你不能改变的,有智慧去区分上面的两种情况http://bbs.bioon.net/bbs/?66210

3楼2010-07-20 22:22:40

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