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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】2×GC buffer 与普通buffer的差异
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C-JingX

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】2×GC buffer 与普通buffer的差异已有1人参与

我的目的基因长度较大，约2700，且GC含量较高，在做菌液PCR时，用的是普通的buffer，没有任何亮带，但用2×GC buffer时，便能跑出亮带，请问这是为什么，我的PCR体系中酶也是用的普通的Taq酶，为什么用普通的buffer就不行呢
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1楼2010-07-20 11:25:58
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
C-JingX(金币+3):谢谢，对我很有帮助 2010-07-21 10:23:57
re楼主
因为GC含量很高的模板，在解链、退火的过程中容易形成复杂二级结构，Taq酶卡住过不去，所以扩不出来
加了DMSO可以降低解开二级结构的温度
当然还有一些离子可以增强Taq酶活性，等等

有许多种类的PCR增强剂的，感兴趣的话可以查查文献，一般在核酸研究上面有
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3楼2010-07-20 19:22:07
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
lstt09nk(金币+1):感谢交流，希望对楼主有所帮助~ 2010-07-20 11:50:38
C-JingX(金币+2):谢谢，再想问问，用普通的buffer跑不出来的原因是什么，它影响了什么啊 2010-07-20 14:29:17
GC buffer含有DMSO之类的PCR增强剂以及调整解链温度的东西~
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2楼2010-07-20 11:34:12
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