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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】有没有人像我这样PCR一会做的出来一会又做不出来的
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zemin_fang

木虫 (正式写手)
★
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pcr如果以前做出来了，那表明你的程序没有问题，剩下的就是加入的试剂问题了，酶、模板、引物、dNTP一样一样换，总能找到原因。
再者，操作需细心，不要错加或漏加试剂。
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11楼2010-06-23 16:57:52
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zlio.love

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
嗯  实验总难免的
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12楼2010-06-23 17:02:31
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peilaming

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
做几个阳性和隐性
对照，换下酶，和引物。原因很多，P不出来或不稳定都很难简单找出哪一方面原因
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13楼2010-06-23 17:20:59
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pushizi

木虫 (小有名气)

pushizi
引用回帖:
Originally posted by savid888 at 2010-06-22 22:43:02:
说说你的操作细节吧
否则神也帮不了你

我养了两次菌，第二次是第一次的传代。
这两批菌分别提基因组，相同的方法
PCR用的是相同的条件（退火温度，引物，buffer，dNTP）
一个有条带，一个没有条带。。。。。。。
（这两次的基因组扩另一个基因的结果相同）
没法解释了。。。。。
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但愿快乐不停歇，悲伤不再来~
14楼2010-06-23 19:47:48
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bioxiaoqiang

金虫 (正式写手)
★
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这种情况是不是引物的问题呢？重新换引物试一试吧。
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15楼2010-06-23 19:56:25
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bioxiaoqiang

金虫 (正式写手)
补充呀，你最好在实验设计时做上阴性和阳性对照。
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16楼2010-06-23 19:57:09
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newlbs

金虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我也遇到过类似的问题，但后来发现是因为没有把matermix混合均匀，造成时好时坏的结果。你一项的排查吧，加个positive control就知道问题是PCR还是DNA了
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17楼2010-06-23 20:42:25
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