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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

[交流] 【求助/交流】求助:关于做过量表达的基因的引物设计!已有3人参与

我现在要做一个基因的过量表达,需要设计这个基因的引物,听师姐说要保证这个基因的完整性,必须把启动子包含进去,不知道这个引物如何来进行设计,复制序列设计引物的时候往这个基因前多少bp复制?我所用的载体质粒上面有一个强启动子。
还有启动子(原核)一般是在基因前面具体什么位置?
谢谢!

[ Last edited by 天使托 on 2010-6-13 at 21:33 ]
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dfl204

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流,欢迎继续探讨。 2010-06-13 22:07:12
没有必要包含启动子部分吧。
如果一定要有的话,应该是一段5‘UTR的序列;
如果所用载体本身携带有启动子的话,按其终止的位置到目的基因之间不能有ATG起始密码子,如果有,到你目的基因的地方也需要是3的倍数,以防止移码!
2楼2010-06-13 21:17:16
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

引用回帖:
Originally posted by dfl204 at 2010-06-13 21:17:16:
没有必要包含启动子部分吧。
如果一定要有的话,应该是一段5‘UTR的序列;
如果所用载体本身携带有启动子的话,按其终止的位置到目的基因之间不能有ATG起始密码子,如果有,到你目的基因的地方也需要是3的倍数, ...

所用的载体质粒上面有一个强的启动子,但是我觉得如果你所想过量表达的基因没有自身启动子的话,对于整个基因的表达会不会有什么影响?还有就是如果不带自身启动子的话,一般设计引物的时候往这个目的基因前多少bp复制序列啊?谢谢了!
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3楼2010-06-13 21:33:04
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dfl204

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我做的时候都是从ATG开始,不加其自身的启动子了。

仅供参考哈!
4楼2010-06-13 22:22:04
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cf1986616

金虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
做过表达是得要求ATG前必须是AAA嘛?!~
5楼2010-07-06 18:54:28
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