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sdluqun铁杆木虫 (著名写手)
板砖队长
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【求助/交流】求助TA克隆问题 已有9人参与
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前天做的目的片段PCR并且胶回收，经琼脂糖检测，4微升上样量，条带亮度大约D2000 Marker 中的750条带的两倍，即含量约为300ng/ul。当天晚上做上连接，用的是promega的T载体：5ul 2*buffer; 1ul T4连接酶; 1ul（50ng/ul） pGEM-T easy 载体; 3/2/1ul 回收的目的片段; ddH2O补齐至10ul体系。 前天晚上接菌DH5α，昨天早上转接，之后氯化钙法制备了感受态，放置4小时，转化，摇菌，涂板。平板翻过来的时间为20：30，今天早上来实验室看看，阳性对照和样品都是一片空白，郁闷， 恳求高手指点！！！ PS：我的目的基因在1400bp左右，是不是片段偏大不好连呢？ [ Last edited by sdluqun on 2010-6-10 at 19:44 ] |
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