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若水寒星

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助】多糖纯化、检测及分子量测定 已有7人参与

从软骨中提取出一种酸性粘多糖,想把这种粗多糖进一步纯化,利用三氯乙酸脱蛋白、葡聚糖凝胶柱层析,因实验室条件有限,打算用电泳法测多糖分子量。有几个问题请教:①三氯乙酸的浓度怎么选择?②层析流出物检测查到:天青Ⅰ法、硫酸咔唑法、硫酸苯酚法和硫酸蒽酮法等。不知道哪种方法较适合?③测多糖分子量是用SDS电泳还是聚丙烯酰胺凝胶电泳合适?标准品应该怎么选,?
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zhxl81920

至尊木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
三氯乙酸脱蛋白一般浓度控制在10%左右效果好,损失小,当然还要看你的样品了。分子量测定凝胶渗透色谱相对准确一些,但是相对麻烦一些,PAGE电泳的话简单,但是准确性差一些。
又是美好的一天
6楼2010-09-10 08:35:18
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hitzbz

铜虫 (正式写手)


karl2100(金币+1):多谢指教! 2010-06-16 01:12:16
多糖检测,可以使用苯酚硫酸法,注意加硫酸时要尽可能的混匀,基本就没问题了----
当然其他方法用熟了,也可以

测多糖分子量,可以用蓝色葡聚糖做标准品,跑凝胶柱---
stay hungry,stay foolish----------
2楼2010-06-15 13:42:07
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liu200479

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
从软骨中提取出一种酸性粘多糖,想把这种粗多糖进一步纯化,利用三氯乙酸脱蛋白、葡聚糖凝胶柱层析,因实验室条件有限,打算用电泳法测多糖分子量。有几个问题请教:①三氯乙酸的浓度怎么选择?②层析流出物检测查到:天青Ⅰ法、硫酸咔唑法、硫酸苯酚法和硫酸蒽酮法等。不知道哪种方法较适合?③测多糖分子量是用SDS电泳还是聚丙烯酰胺凝胶电泳合适?标准品应该怎么选,?
1酸性多糖最好用硫酸蒽酮法
2看看样品色素含量是否很高,如果色素和多糖结合在一起吸附在柱子上比较麻烦
3三氯乙酸会降解多糖,同一种浸膏用三氯乙酸法分离出来的样品就比sevag法少
4如果你的样品有颜色(非色素)自己会用眼睛看到差别
5测多糖分子量是用SDS电泳还是聚丙烯酰胺凝胶电泳合适,这两种方法测出样品分子量的误差较大,建议用凝胶渗透色谱法测分子量,
你可以用样品从凝胶洗脱下来的保留体积估算分子量在哪个范围,但要记住色谱柱的保留体积是多少毫升
7楼2011-03-23 00:14:01
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