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feiyue122

金虫 (正式写手)

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[交流] 【求助/交流】寻求原因已有1人参与

各位大侠：我现在在在做间接法测定鼠抗人IgG的效价，其主要步骤如下：
1，包被人IgG，1微克/ml的浓度，50微升/孔，37度下，两个小时。
2， 1%BSA封闭，60微升/孔，37度下，两个小时，甩干，37度
3，稀释一系列的抗体浓度，然后按照板的位置，加入孔中，50微升/孔，37度，1个小时，洗版三次。
4，加入HRP标记的羊抗小鼠IgG，浓度为1/5000，37度下，45分钟。
5，洗版4~5遍，然后加如显色液，100微升/孔，37度下，15分钟，
6，加入终止液，50微升/空，
结果出现了很奇怪的现象，就是我的
本底OD值很高，重复了几次实验，其OD值都在0.2以上，有时甚至达到0.4以上，
而空白本底OD值只有0.01以上，从理论上，两者OD值应该是相近的，但是为什么会相差这么多啊，有谁能帮分析分析是什么原因吗？
本底OD值：是指我加包被了鼠抗人IgG的孔中，没有加一抗，而是加了二抗(HRP标记的羊抗小鼠IgG)，然后加入显色液，得的OD值
空白本底OD值：是指我加包被了鼠抗人IgG的孔中，没有加一抗和二抗，然后加显色液，得的OD值。

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