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feiyue122

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】寻求原因 已有1人参与

各位大侠:我现在在在做间接法测定鼠抗人IgG的效价,其主要步骤如下:
1, 包被人IgG,1微克/ml的浓度,50微升/孔,37度下,两个小时。
2, 1%BSA封闭,60微升/孔,37度下,两个小时,甩干,37度
3, 稀释一系列的抗体浓度,然后按照板的位置,加入孔中,50微升/孔,37度,1个小时,洗版三次。
4, 加入HRP标记的羊抗小鼠IgG,浓度为1/5000,37度下,45分钟。
5,洗版4~5遍,然后加如显色液,100微升/孔,37度下,15分钟,
6,加入终止液,50微升/空,
结果出现了很奇怪的现象,就是我的
本底OD值很高,重复了几次实验,其OD值都在0.2以上,有时甚至达到0.4以上,
而空白本底OD值只有0.01以上,从理论上,两者OD值应该是相近的,但是为什么会相差这么多啊,有谁能帮分析分析是什么原因吗?
本底OD值:是指我加包被了鼠抗人IgG的孔中,没有加一抗,而是加了二抗(HRP标记的羊抗小鼠IgG),然后加入显色液,得的OD值
空白本底OD值:是指我加包被了鼠抗人IgG的孔中,没有加一抗和二抗,然后加显色液,得的OD值。
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nklyw

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
增加悬赏金币吧,这样的话才可能吸引别人帮你解答啊
2楼2010-05-22 00:12:26
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