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haoqian6135

木虫 (正式写手)

蜗牛~

[交流] 【求助/交流】单酶切连接的克隆急…… 已有9人参与

最近做得克隆是单酶切连接的,各种连接体系都试过了就是连不上,各位高手给点意见,如何提高单酶切的连接率,我的酶切位点是EcoR1.
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平和悦衲!
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):欢迎多多交流~~ 2010-05-19 21:22:18
1.单酶切一定要去磷酸化,否则基本上会是载体自连的;
载体单酶切之后一定要去磷酸化,而且磷酸化不彻底也基本上是载体自连;
所以单酶切去磷酸化一定要完全;
2.磷酸化是载体量要少,反应半小时后还要补加CIAP
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
6楼2010-05-19 21:08:08
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dfl204

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):欢迎多多交流~~ 2010-05-19 16:48:39
最好是降载体去磷酸化以后再做连接。
2楼2010-05-19 16:05:54
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xuwei1759

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
将载体先去磷酸化,然后再连接试一试。
纵然春去落花笑,待到秋实何人傲?
3楼2010-05-19 16:06:16
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liyong1981

金虫 (正式写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
同意楼上二位~
4楼2010-05-19 16:17:15
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