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julia0708木虫 (正式写手)
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[交流]
【求助/交流】关于质粒构建与表达的问题已有12人参与
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本人是化学的，实验室最近申请到了一个生物方面的课题，所以有很多的问题都弄不懂，需要向大家请教一下。先谢过大家了。 按照课题的设想，我们需要先得到一种蛋白，然后在体外做它和一些配体的相互作用。所以现在问题的难点是在蛋白的获得的身上。 目前我们想到的方法是通过构建质粒然后进行表达来获得。 但是在构建的时候又有了一些问题。 大概整理了一下，如下： 首先，我们的蛋白是在人和哺乳动物中存在的蛋白，如果要获得这种蛋白，是不是用最常用的大肠杆菌表达系统无法获得有活性的蛋白？ 其次，我们的目的是为了考察蛋白和配体的结合情况，如果这样的话，是不是只要能够保证其蛋白LBD区域的活性就可以了呢？看到有文献报道在大肠杆菌系统中表达了该蛋白的LBD的部分，这个是不是就可以达到我们的目的呢？这样的蛋白是不是具有活性的蛋白？ 另外，还有个问题想问一下，如果已知蛋白的氨基酸序列，是否可以用序列合成仪来合成蛋白？这样的蛋白能否保证活性呢？和之前通过质粒构建表达的方法相比，两者所需要的成本哪个更高一些？ 很多问题不是很懂，说出来也很混乱，希望大家能帮忙解答下，谢谢大家！ |
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11楼2010-05-13 21:38:26