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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 【求助】液相色谱如何准确定量分析计算？
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niuniu20082899

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助】液相色谱如何准确定量分析计算？ 已有9人参与

各位兄弟姐妹，大家好。实验中遇到不顺，真诚的请教大家。
我做的是苯酚羟基化反应，产物中有苯酚，苯二酚（邻，对），苯醌，焦油，用安捷伦1100液相色谱分析，外标法计算选择性和转化率。但一直以来，计算出的结果老是差强人意。偶尔算出一个好的结果，但是一重复又不行了，有时候重复做几次都不一样，很是郁闷。
最近又老算出来选择性超过100%。开始怀疑稀释误差的问题（样品是稀释以后去测的)，但现在操作的时候非常小心了，怀疑标准曲线的问题，但是重新做了好几条了。但结果就是很奇怪，自己想了想：
1.因为液相色谱仪是公用的，所以特意买了专用的色谱柱。但经常测的时候发现柱压不一样，是不是因为这个影响了峰面积，进而影响了结果？柱压的影响这么大么？
2.是不是外标法就不准确？该用单点校正法？之前觉得每次测样前都配一个标样有点麻烦，所以没用。
3.还是别的什么原因？
我用的柱子是ZORBAX SB-C18, 用的甲醇：水=3：7，每个峰都分的很开。取样后离心去掉催化剂，再定量稀释然后去测的。
因为分析的问题有时候做实验都怕是白做，很着急，希望好心人和懂的高手给予指点，不胜感激，谢谢了，祝你们学业事业有成。
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1楼 2010-05-11 14:56:16
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breeze33020

新虫 (初入文坛)
★
niuniu20082899(金币+1): 谢谢参与
柱压确实影响重现性，所以每次测样之前最好用你的初始条件走一段时间，保证每次柱压基本稳定在同样的范围再测样
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15楼2012-06-20 19:32:45
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ABCzero

至尊木虫 (正式写手)
★
niuniu20082899(金币+1):谢谢参与
niuniu20082899(金币+5):非常感谢您的指点，祝你科研或者工作顺利 2010-05-12 21:24:29
柱压变化主要会影响保留时间，对峰面积影响不大吧。
你所说的重复性不好，是液相进同一个样品重复不好还是不同的样品。如果不同的样品那是你反应的问题。选择性超过100%你是怎么计算的？个人觉得还是你的计算方法是否正确
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9楼2010-05-12 20:51:29
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ABCzero

至尊木虫 (正式写手)
★
waiy2001(金币+1):谢谢你的参与 2010-05-15 23:13:15
引用回帖:
Originally posted by niuniu20082899 at 2010-05-12 21:23:25:

简单来说，比方算苯二酚的选择性：
假设对苯峰面积代入标准曲线得浓度C1(g/ml)；邻苯峰面积对应浓度C2，苯酚峰面积对应浓度C，溶液总体积V，稀释倍数20，初始苯酚加入量m(g),如下

[img]http://pic.emuch.ne ...

公式应该没错吧，那有没有做过空白以及反应投料时的组分测试啊？
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11楼2010-05-15 22:39:45
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笑语

木虫 (小有名气)
★
niuniu20082899(金币+1):谢谢参与
是不是你的样品峰面积本来就比较小，基线波动什么的对计算出来的浓度影响比较大！
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12楼2010-05-18 11:07:17
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caoyexia

银虫 (小有名气)
★
niuniu20082899(金币+1):谢谢参与
重现性实验必须每次实验条件相同包括柱压柱温等不能相差太大
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13楼2010-05-18 11:42:32
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普通回帖

fufangmin2

金虫 (初入文坛)

XINCONG
★
niuniu20082899(金币+1):谢谢参与
重现性如何?RSD应小于1.5%，保留时间的重现性如何？如不好，准确性较低。
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XINCONG
2楼2010-05-11 16:53:52
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坏男孩№亮

金虫 (正式写手)
★
niuniu20082899(金币+1):谢谢参与
我也期待答案
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3楼2010-05-11 17:19:48
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menglin1983

新虫 (初入文坛)
★ ★
niuniu20082899(金币+1):谢谢参与
biore7456(金币+1):感谢参与交流！欢迎常来分析版！ 2010-05-11 19:11:31
有时候确实柱压不同会对结果有影响，但为什么我也说不上来，因为自己也遇到过这样的情况，但这是柱压差别很大的情况才会发生。不知道你的柱压不同到底有多大的差别，是不是柱子没冲洗好，再者是进气泡了都可能导致结果不准。
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4楼2010-05-11 19:01:50
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niuniu20082899

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by menglin1983 at 2010-05-11 19:01:50:
有时候确实柱压不同会对结果有影响，但为什么我也说不上来，因为自己也遇到过这样的情况，但这是柱压差别很大的情况才会发生。不知道你的柱压不同到底有多大的差别，是不是柱子没冲洗好，再者是进气泡了都可能导致 ...

也不算很大，最多差别30bar吧，每次冲的时间也很长，不过仪器是公用的，有时候就是不一样
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5楼2010-05-11 21:10:17
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niuniu20082899

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by fufangmin2 at 2010-05-11 16:53:52:
重现性如何?RSD应小于1.5%，保留时间的重现性如何？如不好，准确性较低。

重现性？RSD怎么计算呢？我不太懂，保留时间差别是不大，多谢指点
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6楼2010-05-11 21:14:09
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niuniu20082899

金虫 (正式写手)
还有没有兄弟姐妹帮忙了，小弟真的不懂，感激不尽
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7楼2010-05-12 10:42:53
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menglin1983

新虫 (初入文坛)
★
铁甲骑兵(金币+1):欢迎常来小木虫参加讨论。 2010-05-12 20:44:31
niuniu20082899(金币+5):非常感谢您的指点 2010-05-12 20:59:51
引用回帖:
Originally posted by niuniu20082899 at 2010-05-11 21:10:17:

也不算很大，最多差别30bar吧，每次冲的时间也很长，不过仪器是公用的，有时候就是不一样

个人觉得30bar已经很大了，我们平时用的时候，有柱温箱，一般都控制温度恒定的，基本同意条件不会有这么大的变化，最多10bar上下浮动，通常小于5bar.是不是走过缓冲盐的流动相啊，用水低流速长时间冲洗，再换乙腈冲洗试试看。是不是有些不物残留在柱子中没有及时冲洗导致柱压偏高啊，可以尝试用异丙醇试试，我没碰到这种情况。
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8楼2010-05-12 20:33:40
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niuniu20082899

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by ABCzero at 2010-05-12 20:51:29:
柱压变化主要会影响保留时间，对峰面积影响不大吧。
你所说的重复性不好，是液相进同一个样品重复不好还是不同的样品。如果不同的样品那是你反应的问题。选择性超过100%你是怎么计算的？个人觉得还是你的计算方法 ...

简单来说，比方算苯二酚的选择性：
假设对苯峰面积代入标准曲线得浓度C1(g/ml)；邻苯峰面积对应浓度C2，苯酚峰面积对应浓度C，溶液总体积V，稀释倍数20，初始苯酚加入量m(g),如下


这样计算对吗？以前看别的同学是这样算的，有什么问题请指出。谢谢了
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10楼2010-05-12 21:23:25
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